细胞转染

Lonza 电转仪（如 Lonza 的 Nucleofector 系列）主要设计用于动物细胞和一些较为脆弱的细胞类型，比如哺乳动物细胞、原代细胞、干细胞等。这类电转仪器的主要特点是通过特定的低压和特定波形脉冲，能在不损伤细胞的情况下实现较高的转染效率。因此，Lonza 电转仪并不是专门为藻类细胞设计的，使用时可能会遇到一些问题和限制。 使用 Lonza 电转 …

1.细胞密度 　　一般来说，当细胞密度达到60%～80%时进行转染可以取得较高的转染效率，过低或过高都会影响转染效果。 2.细胞状态 　　这点非常关键，很多时候传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂敏感度的改变。因此，为了提高转染效率以及转染稳定性、降低细胞毒性，应尽量使用适度传代的细胞系，并在不同次实验时保持细胞传代次数的一致性。 　　还有，尽量选择无 …

我的建议： 通常来说，如果你想研究miRNA对划痕愈合（细胞迁移）的影响，建议先进行miRNA转染，等待足够的时间让miRNA发挥作用（你提到的是三天），然后再进行划痕实验。这可以确保在进行划痕实验时，RUNX1已经被下调，迁移实验所观察到的结果是由RUNX1抑制所导致的。 但如果你担心转染后细胞的粘附性不好或者转染效率不高，也可以先进行划痕实验，让细胞在板 …

1.   电场强度要合适 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2.   细胞状态要好 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2 …

1）优化条件：质粒不同，所转染的细胞不同及定量的准确性等因素会导致在一些情况下所做的转染不在该优化条件内。这种情况下需要对质粒转染试剂的配比进行优化。另外，可选用更合适的转染试剂，如Entranster试剂。 2）抑制剂：不要在用于制备DNA-转染试剂复合物的培养基中使用抗生素，EDTA，柠檬酸盐，磷酸盐，RPMI，硫酸软骨素，透明质酸，硫酸葡聚糖或其他硫酸 …

一般来说，慢病毒感染时，病毒量的计算主要依据目标MOI（Multiplicity of Infection）以及当前的细胞数量。铺板后24小时的细胞数量可能会有所增加，具体情况取决于细胞的增殖速度。 如果在铺板24小时后进行感染，通常需要考虑细胞的增殖情况来调整病毒量。如果您的细胞在这段时间内大约增殖了一倍，那么可以按铺板时细胞数的两倍来计算所需病毒量，以确 …

1）优化条件：质粒不同，所转染的细胞不同及定量的准确性等因素会导致在一些情况下所做的转染不在该优化条件内。这种情况下需要对质粒转染试剂的配比进行优化。另外，可选用更合适的转染试剂，如Entranster试剂。 2）抑制剂：不要在用于制备DNA-转染试剂复合物的培养基中使用抗生素，EDTA，柠檬酸盐，磷酸盐，RPMI，硫酸软骨素，透明质酸，硫酸葡聚糖或其他硫酸 …

DNA转染效率低的原因可从以下几方面找： 1.质粒DNA或混和液中含有血清。 对策：用无血清培养基或Opti-MEM培养基。 2.质粒DNA和转染试剂的比率不是最优 对策：对大多数细胞而言，质粒DNA和转染试剂的比例为1:2-1:3，一般要做优化实验，比例从1:0.5-1:5 逐一检测。 3.质粒DNA 已部分降解或质量不够好 对策：用好的质粒纯化试剂确保质 …

1. 使用不同的启动子：为两个质粒选择不同类型的启动子，避免它们之间的竞争 这个建议是针对以下情况的： 启动子竞争效应：如果两个质粒使用相同或类似的启动子，尤其是强启动子（例如，CMV启动子），它们可能会争夺有限的转录因子和转录机制资源（如RNA聚合酶）。这种情况下，启动子竞争可能导致一个质粒的表达被抑制，从而影响另一个质粒的表达。 例如，如果两个质粒都使用 …

如果细胞密度较低，一般来说，细胞在转染前的培养时间是很关键的。48小时的培养时间通常是足够的，但是否适合转染还要考虑几个因素： 1. 细胞的生长状态 细胞在转染时最好处于对数生长期，也就是细胞在活跃分裂和增殖中。若细胞密度过低，可能会处于生长迟缓或衰退状态，这会影响转染效率。 细胞密度太低（<30%）：如果细胞太少，可能会影响转染试剂的吸附和细胞的转染 …