英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
本方案介绍如何将合成的siRNA 有义链和反义链复性形成双链siRNA, 以及利用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳对双链siRNA 进行分析。 试剂 丙烯酰胺： 双丙烯酰胺（19 : 1, 40%, m/V)过硫酸铵( 10%, m/V) 复性缓冲液（10 X ) 2‘ 脱保护缓冲液[100 mmol/L 乙酸，用四甲基乙二胺( TEMED) 调整pH …
阅读更多 »WB发光检测中常见的问题及解决方法
免疫印迹试验（Western blot）是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法，被广泛应用于蛋白表达水平的研究、抗体活性检测和早期疾病诊断等多个方面。其中较为简单也为大家所普遍接受的Western blot显色方法为底物化学发光法ECL，文章根据发光检测中常见的几种问题现象与各位生物人一起探讨。疫印迹试验（Western blot）是分子生物 …
阅读更多 »转子的类型及用途
转子主要有4 种类型：角式、外摆式、连续流式以及区带式。只有角式与外摆式转子是标准的实验室仪器，另外两种只用作专门用途。 角式转子 用途：样品浓缩。实验室中的“苦力” 。 说明：样品沿着与旋转平面成一定角度的方向离心。 优点：离心见效最快。物质具有更高的相对离心力，比在外摆式转子中沉降快。机器的活动组件少，损坏机会小。 缺点：物质被驱向离心管的管壁方向，然后 …
阅读更多 »电穿孔和电融合技术原理及流程
[实验原理] 当细胞置于非常高的电场中，细胞膜就变得具有通透性，能让外界的分子扩散进细胞内，这一现象称为电穿孔。运用这一技术，许多物质，包括DNA、RNA、蛋白质、药物、抗体和荧光探针都能载入细胞。作为一种基因转导方法，电穿孔已被广泛用于各种细胞类型，包括细菌、酵母、植物和动物细胞；而且，它还能作为注射方法（称为电注射），把各种外源物质引入活细胞。与其他常用 …
阅读更多 »实验室最常用的移液枪你用对了吗？
移液枪对我们医药生物研究人员来说是最熟悉不过了。可是，你真正了解它吗？你的使用方式是正确的吗？相信不少人听到这个问题后，已经开始回想自己平时的操作，也有一部分人在认真考虑答案了吧。细节决定成败，今天在这里跟大家普及一下移液枪的使用规程，希望对大家以后的实验有帮助。 一、移液枪的使用规程 1. 移液枪的放置 移液枪要放在支架上 2. 样品准备 要求液体温度与吸 …
阅读更多 »蛋白质的水平测定-含有去污剂的情况
去污剂是蛋白质生命的一部分，用于细胞裂解以及变性蛋白质，但是去污剂会干扰蛋白质水平和蛋白质功能的测定。 要测定含有去污剂的样品中蛋白质的水平，可以有两个选择： 标准曲线的测定中包括相同比例的去污剂。得到一个准确的定量是必须的。去污剂会影响标准曲线的线性读数，你可以稀释样品到线性范围，但是对于低浓度的蛋白质样品这个方法不可行。 用可以带有去污剂的蛋白质测量方法 …
阅读更多 »什么是凝胶迁移或电泳迁移率实验？
凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA-electrophoretic mobility shift assay）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。 通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一 …
阅读更多 »建立透析的方法步骤
1. 剪下一段足够装得下要透析物质的透析袋，在每个末端留下大概2 英寸（总共留下4英寸）来捆绑透析袋。（可以买到特殊的管子来进行微量的透析。）2. 透析袋的两端都要打结，或者用透析夹封住末端。3. 用戴手套的手打开透析袋的一个末端，另一个手拿住透析袋，把样品认真地装入透析袋中。4. 扎住或者夹住透析袋的末端，夹住之前先挤压赶走气泡，检查渗漏，尤其注意末端。5 …
阅读更多 »UHRF1如何调控AMPK的活性？在细胞代谢中又有哪些关键作用？
AMPK是细胞极为重要的能量感受器，当细胞处于能量匮乏的状态时AMPK会被激活，AMPK激活后可以磷酸化不同的下游底物从而促进分解代谢和抑制合成代谢，最终使细胞达到能量平衡状态。 UHRF1是至关重要的DNA甲基化调控因子，它参与DNA维持甲基化过程的功能已经研究的比较清楚。另外，还有研究表明UHRF1参与DNA的损伤修复。但除此之外，UHRF1是否能直接 …
阅读更多 »抗体标记的步骤
下列步骤描述了使用Cy3作为代表性标记试剂， 用荧光succinimidy l 活性酶标记羊抗体。其他水溶性荧光标记物的使用与此类似(Mujumdar et al. 1993) 抗体分离与纯化 来源于血清，腹水或培养基的抗体，在标记反应开始以前，需纯化以除去蛋白质和其他含有氨基团的分子。在与标记反应混合以前，抗体不应进行强缓冲处理，不然标记混合物会降低，所有 …
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