2025年 3 月 18日, 星期二
新闻

核酸基因

利用CRISPR精确编辑过敏原基因

过敏性疾病是一个持续存在的临床挑战,治疗选择有限。因此,找到一种治疗过敏原的方法、改善过敏性疾病的技术尤为重要。 2022年1月17日,美国INDOOR生物技术公司的研究团队在《Frontiersin Allergy》杂志上发表了一篇题为 New Frontiers: Precise Editing ofAllergen Genes Using CRISPR …

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如何评估Real-time qPCR定量检测?

一、Real-time qPCR定量方法 可以分为绝对定量和相对定量。 绝对定量是用一系列已知浓度的标准品制作标准曲线,在相同的条件下目的基因测得的荧光信号量同标准曲线进行比较,从而得到目的基因的量。该标准品可以是纯化的质粒DNA,体外转录的RNA,或者是体外合成的ssDNA。 相对定量可以分为比较Ct法和其他一些相对方法。比较Ct指的是通过与内参基因Ct值 …

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慢病毒感染后72小时,效率低,细胞已经长满,有什么办法补救?

在慢病毒感染后72小时感染效率较低、细胞已经长满的情况下,可以尝试以下几个措施来提高感染效率并优化实验条件: 细胞传代或重新播种:如果细胞已经长满(汇合度较高),可能会影响慢病毒的感染效率。可以将细胞进行传代,重新播种在新的培养板上,使其达到较低的汇合度(例如30-50%),然后再进行感染。 优化感染时的MOI(Multiplicity of Infecti …

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从革兰氏阴性菌(如E.coli)中分离DNA

从细菌中分离DNA 需要依赖SDS 和蛋白酶K 以裂解细胞。高分子质量的DNA 需要剪切(以减少它的黏性,更适合操作),用酚和氯仿提取,再用异丙醇提纯。该方案可以分离到长度为3 0 ~ 80kb 的DNA 。 试剂 乙酸铣( 5mol/L ) 细菌培养基(≥l.5mL) 培养基需要在剧烈振荡中过夜。 氯仿 乙醇(70%, 95%) 异丙醇 氯化钠( 5mol …

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DNA 样品的酚抽提

酚抽提通常用来对DNA 或RNA 样品进行蛋白质的去除。酚与水不互溶,当它们混合时会形成两相,水相和酚相。当含有DNA 的水溶液与酚混合时,蛋白质会进入酚相,再将含DNA 的水相取出进行再抽提和乙醇沉淀浓缩。 一、材料 抗有机溶剂的塑料管,尝试尽可能小的体积,大多数的抽提可以在微量离心管中进行。 TE 饱和的酚:氯仿:异戊醇(25 : 24:1) 氯仿:异戊 …

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离心机的种类

有很多关于离心机类型的描述性术语,但那些不是严格的定义。在实验室中,离心机通常以制造者的名字相称。 高速与超速离心机都带有冷冻装置,之所以需要冷冻是因为高速离心会产生热。其他离心机有带或不带冷冻装置的型号。 台式离心机, 也称为多用途离心机。不一定放在实验台上,反而经常放在桌子底下。 用途:沉淀细胞与细菌、酚抽提。 g 值与每分钟旋转次数: 角式17000 …

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如何做好Northern Blot实验?

准备阶段:1.180度烤器皿:三角锥瓶、量筒、镊子、刀片等4小时。电泳槽:清洗梳子和电泳槽,并用双氧水浸泡过夜,用DEPC水冲洗,干燥备用。处理DEPC水(2 L)备用。2.用RNAZaP去除用具表面的RNase酶污染用RNAZap擦洗梳子,电泳槽,刀片等,然后用DEPC水冲洗二次,去除RNAZap。 制胶: 1. 称取0.36mg琼脂糖加入三角锥瓶中,加入 …

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小RNA 的Northern 杂交分析

该方案描述如何运用Northern 杂交检测15~150 个核昔酸的小RNA (图1) 。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离总RNA, 再采用半干法进行转膜。RNA 通过紫外线照射交联至尼龙膜上,在Church 缓冲液中对RNA 和α-32p标记的寡核昔酸探针进行杂交,并用磷酸成像分析技术(phosphorimager analysis) 进行检测分析。使用包含两个 …

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PCR实验最常见的9个问题及解决方案

1. 如何有效设计引物 (1)使用Oligo或Primer设计引物,在保守区内设计,长度一般在18-27bp,上下游引物Tm值最好是60-75℃,GC含量=40%-60%,引物自身及引物之间不应存在互补序列,避免发夹结构。 2. PCR电泳无扩增条带 (1)酶失活或在反应体系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或运输不当而失活,往往通过更换新酶或用另一来源的 …

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