实验方法及步骤 探针变性 将探针在75℃恒温水浴中温育5 min,立即置0℃,5~10 min,使双链DNA探针变性。 标本变性 将制备好的染色体玻片标本于50℃培养箱中烤片2~3 h。(经Giemsa染色的标本需预先在固定液中退色后再烤片)。 取出玻片标本,将其浸在70~75℃的体积分数70% 甲酰胺/2×SSC的变性液中变性2~3 min。 立即按顺序将 …
阅读更多 »2022的七大热点技术: 靶向基因治疗、空间多组学……
1.完全基因组 在去年5月发表的预印本中,人类共有基因组序列 GRCh38 添加了近 2 亿个新碱基对,并撰写了人类基因组的最后一章。 GRCh38 于 2013 年首次发布,一直是一个有价值的工具,但也存在漏洞。主要是因为测序技术产生的读数准确但较短。它们的长度不足以明确地绘制出高度重复的基因组序列,包括覆盖染色体末端的端粒和在细胞分裂过程中协调新复制的 …
阅读更多 »用测序酶进行标记/终止测序反应常见问题
问题 可能的原因 解决办法 四条泳道同一个位置都有条带,特别是靠近引物的地方 DNA 模板不纯 观察对照DNA 是否存在同样问题,如果不存在,重新制备模板DNA 试剂不纯或试剂老化;dNTP量不足 准备新鲜试剂 DNA 聚合酶活性低 使用新鲜制备的酶。 加入更多的酶,如每个反应多加4 倍。使用前再稀释酶. 将标记反应缩减至2 min, 将T7DNA 聚合酶从 …
阅读更多 »应用长链dsRNA 抑制基因表达
在植物以及大多数真菌、非哺乳动物及其细胞系中,应用外源性长链dsRNA或者表达长反向重复RNA 转录物能够诱发细胞内相应mRNA 的降解(Fire et al 1998; Kennerdell and Carthew 1998; Misquitta and Paterson 1999) 。哺乳动物卵母细胞和dsRNA 诱导干扰素反应缺失的哺乳动物细胞系中,长 …
阅读更多 »转子的类型及用途
转子主要有4 种类型:角式、外摆式、连续流式以及区带式。只有角式与外摆式转子是标准的实验室仪器,另外两种只用作专门用途。 角式转子 用途:样品浓缩。实验室中的“苦力” 。 说明:样品沿着与旋转平面成一定角度的方向离心。 优点:离心见效最快。物质具有更高的相对离心力,比在外摆式转子中沉降快。机器的活动组件少,损坏机会小。 缺点:物质被驱向离心管的管壁方向,然后 …
阅读更多 »采用dsRNA 浸泡果蝇S2 细胞进行RNA 干扰
该方案是一种通过用含有dsRNA 的培养液浸泡果蝇S2 细胞来诱导RNA 干扰的简便方法。与转染方法相比,浸泡操作需要的步骤更少,因此可用于高通量的RNA 干扰筛选。而且, 浸泡避免了转染试剂可能带来的毒性,但是,通过浸泡向果蝇S2 细胞转运dsRNA 的效率与转染方法相比较低。对于通过浸泡dsRNA 难以抑制其表达的基因,可以通过多次转染dsRNA 获得抑 …
阅读更多 »RNA沉淀方法
乙醇沉淀RNA通常RNA 可以像DNA 一样沉淀。步骤1. 加入1/10 体积1 mol/L 的NaOAc (pH4. 8) 和2.5 倍体积冷的95 %的乙醇。2.-20 ℃ 下沉淀过夜。3. 用70 %的乙醇洗涤沉淀。注意:当你处理少量RNA 的时候(低于5 μg) ,在RNA 沉淀之前加入一些载体或者共沉淀物,这类物质将帮助沉淀RNA, 更容易看见沉淀 …
阅读更多 »RNA 凝胶电泳注意事项
RNA 凝胶是用Northern 印迹的方法来分析RNA 。mRNA 大约只占总RNA 的5% ,在溴化乙锭染色的胶上看不到,因此mRNA 必须用标记探针来检测。 *样品制备 RNA 样品在电泳之前及电泳过程中必须是变性的,否则不能精确测定分子质量。变性是由甲醛与甲酰胺来完成的,也可用乙二醛和二甲亚砜或甲基苯(不推荐)。 MOPS 胶的样品缓冲液: 0.75 …
阅读更多 »慢病毒感染细胞后,细胞长满48小时是否可以先传代,再等到72小时再喷霉素筛选吗
通常在进行慢病毒感染后,建议遵循以下操作步骤: 感染后观察细胞状态:感染后一般在48-72小时内可以看到较为明显的表达,但是否开始筛选需要看细胞的状态和感染效率。如果细胞长满了,可以考虑先进行传代,以避免细胞过度拥挤影响生长和感染效果。 喷霉素筛选的时机:喷霉素通常在感染后48-72小时开始筛选,但实际开始筛选的时间取决于感染效率和细胞状态。如果细胞感染后状 …
阅读更多 »原位PCR原理与操作步骤
原位PCR 在科学研究中,每一项新技术的创立都会带来一系列新的研究成果问世,从而推动着各学科的发展。纵观形态研究领域,50年代电子显微镜引入形态学观察领域,带来了从细胞水平到亚细胞水平的深入研究;60-70年代,免疫组织化学与免疫细胞化学技术的广泛应用,又将观察的水平由亚细胞结构推向了蛋白质分子水平,使细胞内众多的活性物质得以进行细胞或亚细胞水平的定位,对医 …
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