英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下mRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那么 …
阅读更多 »怎样提高悬浮细胞的siRNA转染效率？
悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染，其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。 目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂，脂质体转染是基于电荷吸引原理，先形成 …
阅读更多 »siRNA转染（Entranster）与成纤维细胞瘤细胞l929-a研究
L929成纤维细胞瘤细胞（l929-a）和L929纤维肉瘤细胞（l929-n）是不同的细胞系，常用于肿瘤坏死的细胞毒性因子α（TNFα）的研究，TNFa已被报道可诱导两种细胞系的坏死。然而，当比较TNFα诱导的在这两个细胞系的细胞死亡时，l929-n表现出典型的RIP3依赖性细胞坏死，在l929-a中却不是。现分享一篇运用siRNA转染（Entr …
阅读更多 »RNA转染注意事项
为保证RNA转染的高效率，在转染过程中应注意： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境 …
阅读更多 »提高RNA转染效率的几点建议
1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与人单核细胞来源的树突状细胞的染色质状态调控研究
树突状细胞（DCS）是抗原（Ag）呈递细胞，具有独特的刺激幼T细胞和启动原发性免疫应答的能力。然而，DCs在中枢和外周免疫耐受的诱导和T细胞免疫应答的类型的调节中也具有关键性的作用。依赖于环境，树突状细胞（DCS）可能变得活跃或耐受性，但很少知道是否遗传的表观遗传修饰涉及这些过程。现分享一篇RNA转染（Entranster）与人单核细胞来源的树突状细胞的染色 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与睾丸生殖细胞肿瘤研究
睾丸生殖细胞瘤(Testic..cell tumors,TGCTs)是青少年和青年男性最常见的实体瘤之一,约占2012年全世界20～39岁男性肿瘤的8.9%。肿瘤生长受癌细胞与肿瘤微环境的串扰调制。最近的进展表明，肿瘤细胞中的miRNA功能障碍可以调节肿瘤微环境以间接决定其进展。然而，这一过程在睾丸生殖细胞肿瘤（TGCTs）中知之甚少。现分享一篇RNA转染（ …
阅读更多 »siRNA转染和DNA转染有什么不同？
首先siRNA由于只有二十几个碱基对，相比DNA几千上万对碱基，小了许多。目前大多数转染试剂都针对比较大的质粒DNA，而非小的RNA分子。用于转染DNA的转染试剂和方法并不完全适用于转染siRNA。 其次，siRNA转染比DNA转染对转染试剂细胞毒性的要求严格。由于转染试剂对细胞的毒性往往是对众多基因直接地或间接地上调或下调的结果，这对于过量表达的DNA转染 …
阅读更多 »RNA转染与脊髓损伤后神经细胞凋亡研究
脊髓损伤（SCI）是一种常见的创伤，在损伤组织初始损伤后小时和几天内会有二次细胞变性的发生，会影响到感觉和病变部位运动信号以及神经系统的传导。脊髓损伤后的神经退行性疾病是严重的，其中许多与SCI患者终生残疾有关。现分享一篇RNA转染（Entranster）与脊髓损伤后神经细胞凋亡研究的文献，以供参考。
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与整合素αvβ3和微重力相关骨丢失研究
机械刺激和生物因素协同调节骨的发育和再生，但其基础机制却知之甚少。微重力诱导骨丢失，这可能地与抗局部细胞因子的发展有关，包括胰岛素样生长因子1（IGF-1）。现分享一篇RNA转染（Entranster）与整合素αvβ3和微重力相关骨丢失研究的文献，以供参考。
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