英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与骨髓瘤细胞中TRAF6蛋白表达水平研究
肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）是一种重要的E3泛素连接酶 ，在先天免疫和适应性免疫中有着重要的作用 。TRAF6被报道可参与鳞状细胞癌和胃癌的侵袭性生长和转移，以及骨髓增生异常综合征和急性髓系白血病 。由于TRAF6在众多的信号转导通路具有很重要的地位，使得它成为肿瘤治疗的一个潜在靶点。现分享一篇RNA转染（Entranster）与骨髓 …
阅读更多 »RNA转染与LncRNA SNHG12对胃癌细胞BGC-823增殖的影响研究
胃癌是一种常见的上皮性癌，是世界范围内最常见的第五种恶性肿瘤。近年来胃癌的发病率一直呈上升趋势。每年约有一百万例胃癌发生，其中东亚地区占到50%，尤其是中国，严重危害人民健康和生命。中国胃癌的年发病率约为400000，占全世界病例总数的42%，并且总死亡率逐年上升。因此，寻找可靠的胃癌标志物和靶点是至关重要的 …
阅读更多 »细胞RNA转染实验的一些建议
1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …
阅读更多 »体内外RNA转染（Entranster）与sirtuin3和肾缺血再灌注损伤研究
缺血再灌注（I/R）可引起急性肾损伤，其特征是增加活性氧（ROS）和线粒体损伤，并破坏肾小管上皮细胞的细胞极性、细胞骨架完整性和细胞基质和细胞-细胞相互作用。线粒体蛋白sirtuin 3（SIRT3）可能有助于减轻或预防I/R损伤。SIRT3过表达有助于恢复急性肾损伤模型中线粒体的动态变化。但关于SIRT3是否能够及如何减轻I/R引起的急性肾 …
阅读更多 »siRNA转染与成纤维细胞瘤细胞l929-a研究
L929成纤维细胞瘤细胞（l929-a）和L929纤维肉瘤细胞（l929-n）是不同的细胞系，常用于肿瘤坏死的细胞毒性因子α（TNFα）的研究，TNFa已被报道可诱导两种细胞系的坏死。然而，当比较TNFα诱导的在这两个细胞系的细胞死亡时，l929-n表现出典型的RIP3依赖性细胞坏死，在l929-a中却不是 …
阅读更多 »如何优化细胞RNA转染实验条件？
可从以下几方面进行优化： 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如 …
阅读更多 »siRNA转染实验步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …
阅读更多 »RNA转染与IL-17下调小鼠胶原性关节炎嗅间充质干细胞的免疫抑制能力研究
嗅间充质干细胞（OE-MSCs）是嗅觉固有层中一种新的常驻干细胞类型。OE-MSCs通过调节T细胞的反应，包括调节性T细胞（Treg）的上调和Th1/Th17细胞的下调而发挥其免疫抑制能力。作为炎性细胞因子，IL-17在胶原诱导性关节炎（CIA）的发展过程中起着关键的作用。然而，目前尚不清楚IL-17水平的升高是否会影响OE-MSCs在炎症状态 …
阅读更多 »RNA转染（Entranster）与食管鳞状细胞癌的生长抑制和放射增敏作用研究
食管癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，预后差。化疗耐药和癌症复发是其治疗中最困难的问题之一。识别潜在的分子机制是发展新疗法的关键。现分享一篇RNA转染（Entranster）与食管鳞状细胞癌的生长抑制和放射增敏作用研究的文献，以供参考。
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