我认为,要想做好质粒DNA细胞转染实验,应注意以下几点: 1, 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大,又没有经验,选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功 …
阅读更多 »体内转染(Entranster)与骨形态发生蛋白和人软骨肉瘤研究
软骨肉瘤,源自于软骨细胞的恶性肿瘤,是第二最常见的原发性骨肿瘤。对于大多数患者,手术切除仍是首选的治疗方法,但也有很多不能手术的软骨肉瘤位于骨盆和脊柱区。而且,通常的辅助治疗,如化疗和质子束辐射也不能改善治疗结果。因此,例软骨肉瘤继续预后差。因此,迫切需要探索一种新疗法可以应对软骨肉瘤。骨形态发生蛋白是一类生长因子,是肿瘤生长因子β超家族的一个大家族。它们在 …
阅读更多 »体内转染与linc-smad7促进成肌细胞分化和肌肉再生研究
骨骼肌来源于胚胎发育过程中的体细胞,这是一个高度协调的过程,涉及到成肌细胞增殖、分化的各个发育阶段,最终融合成多核肌管和肌纤维。这些发育阶段主要是由一系列肌源性调节因子(mrfs)确定,包括肌源性D、肌源性因子5(myf5)、肌生成素和mrf4,以及肌细胞增强因子2(mef2)家族。之前的研究表明,LncRNAs在表观遗传动力学和基因表达方面具有 …
阅读更多 »siRNA细胞转染实验效率低的原因
1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记,决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件,建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这 …
阅读更多 »如何达到较高的RNA转染效率?
可从以下几方面进行优化: 1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如 …
阅读更多 »体内转染(Entranster)与环状非编码RNA减少基因脱靶效应研究
环状RNA在许多生物系统中被发现。它们大多被认为是microRNA的分子“海绵”,具有许多未知的生物学活性。小干扰RNA作为许多非编码RNA之一,已成为基因表达调控和药物治疗的重要工具。虽然由siRNA介导的靶mRNA裂解具有高度的序列特异性,意外“脱靶”沉默内源基因在细胞中也观察到 …
阅读更多 »一个抑制脑中风的miRNA
MicroRNAs(miRNAs)是一类非编码小RNA,miRNAs能结合到靶基因mRNA的3’非翻译区诱导转录退化和/或抑制翻译。miRNA在多种病理生理过程中发挥着重要的作用。 Let-7c是最丰富且高度保守的miRNA。以往的研究表明,let-7c通过调节细胞增殖和细胞凋亡抑制癌细胞存活率。最近研究表明Let-7c是巨噬细胞极化的重要调节器。 Let- …
阅读更多 »DNA转染(Entranster)与巨噬细胞抗炎作用研究
巨噬细胞(macrophage)活化是宿主防御病原微生物的关键过程,可引起炎症级联反应和炎症介质的释放,如TNF-α、IL-6和NO。反过来这些介质会引起炎症反应以及对邻近组织和巨噬细胞本身产生伤害。现分享一篇DNA转染(Entranster)与巨噬细胞抗炎作用研究的文献,以供参考。
阅读更多 »siRNA转染(engreen)与卫星胶质细胞中P2X7受体研究
嘌呤信号能够引起炎症和免疫反应。卫星胶纸细胞(SGCs)中的P2X嘌呤受体7(P2X7)的激活可能是促进炎症和神经性疼痛中一个必不可少的组成部分。长链非编码RNAs(lncRNAs)参与多种生理和病理过程。现分享一篇针对lncRNA BC168687的小干扰RNA(Entranster)对高糖和高游离脂肪酸环境下卫星胶纸细胞P2X7受体表达的 …
阅读更多 »RNA转染(Entranster)与内皮素-1与肺动脉平滑肌细胞研究
肝肺综合征(HPS)是肝病晚期的严重并发症,其死亡率明显增加。循环介质介导的肺血管重构(PVR)在HPS发病机制中起重要作用,但其机制尚不明确。现分享一篇RNA转染(Entranster)与内皮素-1(ET-1)与肺动脉平滑肌细胞研究的文献,以供参考。
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