有以下几种方法(96 孔板): ①在显色反应后,将培养板放置4℃冰箱内。②每孔加10μl 0.1 M HCL 溶液。③每孔加10μl 的 1%(w/v)的SDS(十二烷基硫酸钠)溶液。注意:反应停止后,应在24 小时之内测定。 如需了解更多关于CCK8产品的信息,请点击https://www.engreen.com.cn/cck-8-kit
阅读更多 »动物体内转染操作视频(engreen)
电转染实验时,siRNA有什么要求?
使用Entranster-E试剂进行电转染实验时,要求使用纯度高、无菌且序列正确的siRNA。确定电转染的最佳siRNA浓度。尝试在250-750nM最终浓度范围内的siRNA浓度。Engreen建议导入一个非靶向或无意义的siRNA控制序列,以验证siRNA的基因特异性。此外,针对具有多个siRNA序列的基因可确保产生的表型不是由于脱靶效应所致 …
阅读更多 »一个抑制脑中风的miRNA
MicroRNAs(miRNAs)是一类非编码小RNA,miRNAs能结合到靶基因mRNA的3’非翻译区诱导转录退化和/或抑制翻译。miRNA在多种病理生理过程中发挥着重要的作用。 Let-7c是最丰富且高度保守的miRNA。以往的研究表明,let-7c通过调节细胞增殖和细胞凋亡抑制癌细胞存活率。最近研究表明Let-7c是巨噬细胞极化的重要调节器。 Let- …
阅读更多 »siRNA转染(Entranster)与YWK-II蛋白/APLP2稳定性研究
YWK-II蛋白/APLP2是一种进化上保守的蛋白家族的成员,包括淀粉样前体蛋白(APP)和淀粉样蛋白前体蛋白(APLP1)。已经表明YWK-II /APLP2在细胞存活方面可作为Müllerian抑制物(MIS)的一种新的G蛋白偶联受体。然而,调节YWK-II /APLP2蛋白的折叠和稳定性的因素尚未确定。现分享一篇siRNA转染(Entra …
阅读更多 »细胞铺板密度对于siRNA转染为什么很重要?
RNA转染试剂Entranster-R4000成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调,但未成功转染的细胞却不受影响,这时转染效率和总的细胞数量就很重要,一般细胞数量较少时转染效率高,一些试剂由于本身毒性的影响,太低的细胞数量时毒性明显,所以会要求较高的细胞密度(汇合度),顺便说一句,看一个转染试剂 …
阅读更多 »高滴度反转录病毒和慢病毒载体的制备
一、试剂 CaCl2 溶液( 2mol/L )、完全培养基、DMEM 培养基、乙醇(或异丙醇) (70% )、胎牛血清( FBS )、HBS 溶液(2X)、HEPES (2.5mmol/L, pH 7.3)、OptiMEM+ 1 %青霉素/链霉素( P/S )、OptiMEM , 无P/S、pCMVDΔR8.91 质粒、pUMVC 质粒、pVSV- G 质粒 …
阅读更多 »体内转染(entranster)与牛磺酸脱氧胆酸减轻早期脑损伤研究
创伤性脑损伤(TBI)是创伤性死亡和致残的主要原因之一,新的研究表明内质网应激在TBI的病理生理过程中起着重要作用。牛磺脱氧胆酸(TUDCA)是一种亲水性胆汁酸,已被报道为ER应激抑制剂和化学伴侣,并具有抑制细胞凋亡和炎症的潜力。 现分享一篇体内转染(Entranster)与牛磺酸脱氧胆酸通过Akt通路激活 …
阅读更多 »体内转染(Entranster)与CREB1基因沉默对血管性痴呆小鼠认知功能障碍的影响研究
血管性痴呆(VD)是老年痴呆的第二大病因,仅次于阿尔茨海默病(AD),在西方国家占所有痴呆病例的17.6%,研究表明在世界东部地区,包括中国和日本人口中,认知功能障碍的人数要更多。认知功能障碍广泛被认为是痴呆患者的经典特征。VD,以各种脑血管疾病为特征的损伤综合征主要与缺血性脑血管疾病相关。目前,VD的确切发病机制仍不清楚。因此,有必要更详细 …
阅读更多 »怎样做好siRNA细胞转染实验
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮 …
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