可能原因: 1. RNA与转染试剂比例不佳。可进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳。 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。 3. RNA效率不高。选择最优RNA,并采用已知高效的RNA做对照。 4. RNA酶污染。建议无RNA酶和内毒素的吸头、离心管和溶液等材料和实验器具。 5. 转染后培养时间不够。在mRNA水平可以到48 小时以后验证结果,在蛋白水 …
阅读更多 »如何通过电穿孔转染DNA?
试剂 运载 DNA l0mg/mL 细胞生长培养基 电穿孔缓冲液 指数生长的培养细胞 线性化或环状质粒DNA ( 1 ~ 5μg/μL , 溶于无菌去离子水) 磷酸盐缓冲液( PBS ) 胰岛素 设备 电穿孔杯 电穿孔仪器 血细胞计数器 组织培养皿或多孔培养板 组织培养瓶(75cm2) 方法 准备电穿孔用细胞。 对于贴壁细胞 电穿孔前一天,通过胰酶消化释放贴 …
阅读更多 »RNA转染过程中细胞毒性大怎么办?
RNA转染时细胞毒性大可能的原因有: 1.RNA与转染试剂比例不佳。建议进行预实验优化。 2.细胞密度不佳。调整细胞密度。 3.细胞污染。建议彻底清洁所有细胞培养相关用品。 4.转染试剂毒性较大。建议选择毒性较小的非脂质体转染试剂,如纳米材料的Entranster试剂等。
阅读更多 »体内转染与大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡和行为恢复研究
外伤性脊髓损伤(T-SCI)是世界范围内常见的一种损伤,常导致严重的神经功能缺损和渐进性退化。T-SCI的病理是原发性损伤和继发性损伤的结果。原发性损伤指的是直接导致脊髓结构损伤,包括细胞死亡、局部轴索损伤、血管破裂以及损伤部位周围的局灶性出血。继发性损伤是由原发性损伤引起的各种分子、细胞和生化反应引起的 …
阅读更多 »增强型ECL发光液-Enlight
产品介绍 用于辣根过氧化物酶(HRP)标记的蛋白或核酸检测。 超300家实验室应用3年,从未想过更换! 主要特点 超灵敏 EnlightTM含独特的发光增强剂,发光灵敏度非常高。 超稳定EnlightTM含独特的发光稳定剂,4℃储存1年以上,信号强度不变。 低背景EnlightTM含精准的发光底物,提高信噪比110倍以上,灵敏度更高背景却更低。 信号强Enl …
阅读更多 »病毒感染增强剂Envirus使用时出现细胞毒性怎么办?
出现细胞毒性的原因有: 1.增强剂用量过大。建议适当减少增强剂用量。 2.病毒量过大。适当减少病毒用量。 3.适当减少病毒用量。增加培养基量或更换培养基。
阅读更多 »电转染实验影响因素
1 电场参数 电场是电转染的重要因素,细胞在电场的作用下,膜通透性增加或是形成小孔,以完成转染过程。因此电场强度是应该被优化的主要参数。电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。因此,一个适宜的电场强度至关重要。 不同细胞系具有不同的最佳场强值,其确定方法除了实验直接测定比较不同场强下转染率的高低外,还可以 …
阅读更多 »ECL发光液(Enlight)与五味子醇乙促进肝再生研究
肝再生是肝损伤后恢复的重要过程,是肝部分切除术(PHx)后的一种很有前景的临床策略。五味子醇乙(Schisandrol B,SOLB)是从华中五味子提取的一种生物活性成分,对小鼠药物性肝损伤具有明显的肝保护作用。然而,SOLB对PHx肝再生的影响尚不清楚。现分享一篇ECL发光液(Enlight)与五味子醇乙促进肝再生研究的文献,以供参考。
阅读更多 »DNA转染效率影响因素
细胞DNA转染效率的影响因素 1.细胞密度 一般来说,当细胞密度达到60%~80%时进行转染可以取得较高的转染效率,过低或过高都会影响转染效果。 2.细胞状态 这点非常关键,很多时候传代次数太少或者太多都将导致细胞对转染试剂敏感度的改变。因此,为了提高转染效率以及转染稳定性、降低细胞毒性,应尽量使用适度传代的细胞系,并在不同次实验时保持细胞传代次数的 …
阅读更多 »Theranostics | 复旦大学儿童医院报道:揭开I型糖尿病的发病机制
该团队在《Theranostics》期刊上发表了题为“Circular RNA circPPM1F modulates M1 macrophage activation and pancreatic islet inflammation in type 1 diabetes mellitus”的论文。实验将circular RNA 通过体内转染 …
阅读更多 »