病毒感染细胞本来效率就较低,一定要注意以下几点:1.感染时的培养基尽量少些;2. 使用病毒感染增强剂Envirus-LV来提高感染效率。 病毒感染细胞本来效率就较低,整个过程相对复杂难操作,一般一次花费周期至少两三个月,多则几个月到十几个月不等,经费也是几万到十几万。万一实验失败需要重复操作会花费更多的时间和开支。所以有效提高病毒转染效 …
阅读更多 »Crispr/Cas9腺病毒构建流程
Crispr/Cas9 简介 CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫机制。目前,来自Streptococcus pyogenes 的CRISPR-Cas9系统应用最为广泛。Cas9 蛋白(含有两个核 …
阅读更多 »慢病毒感染后,细胞不生长怎么办
慢病毒感染后,细胞不生长可能有多种原因。以下是一些常见的原因和解决方法: 病毒滴度过高: 原因:高滴度的慢病毒可能导致细胞毒性,使细胞无法正常生长。 解决方法:降低病毒的滴度,进行一系列稀释实验,找到一个既能有效转染又不影响细胞生长的滴度。 细胞状态不佳: 原因:感染前细胞的健康状态可能影响感染后的生长。 解决方法:确保细胞在最佳状态下进行感染,例如在感染前 …
阅读更多 »高滴度反转录病毒和慢病毒载体的制备
一、试剂 CaCl2 溶液( 2mol/L )、完全培养基、DMEM 培养基、乙醇(或异丙醇) (70% )、胎牛血清( FBS )、HBS 溶液(2X)、HEPES (2.5mmol/L, pH 7.3)、OptiMEM+ 1 %青霉素/链霉素( P/S )、OptiMEM , 无P/S、pCMVDΔR8.91 质粒、pUMVC 质粒、pVSV- G 质粒 …
阅读更多 »什么是腺病毒载体?
腺病毒属于腺病毒科,分为两个属:禽腺病毒属(鸟腺病毒)和哺乳动物腺病毒属(人、猴、牛、马、猪、羊、犬和负鼠腺病毒)。这些病毒均携带一个线性双链DNA 基因组,由直径为70~100mm 的二十面体衣壳蛋白包裹。约36kb 的基因组包括4 个提供调控和复制功能的早期转录单位(El 、E2 、E3 、E4) 、2 个延迟早期单位(IX 和IVa2)和1 个指导包括 …
阅读更多 »病毒感染细胞过程中常出现的问题及解决方案
病毒感染增强剂envirus使用中常出现的问题及解决方案如下:
阅读更多 »请问那乳胶法能测出失活病毒么
乳胶法(Latex agglutination test)是一种常用于检测抗原或抗体的免疫学方法,通过抗原抗体反应引发乳胶微粒的凝集。乳胶试剂通常含有涂有已知抗原或抗体的乳胶微粒,这些微粒能够与相应的抗原或抗体结合,形成可见的凝集反应。 乳胶法检测失活病毒的可行性 乳胶法 本质上是基于抗原-抗体反应来进行检测的。如果病毒被“失活”(即病毒的活性丧失),但其结 …
阅读更多 »如何利用好慢病毒感染的原理和特点?
一、原理 慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体,与化学合成的siRNA 和基于瞬时表达载体构建的普通 siRNA 载体相比,一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用,另一方面,Lentivirus-siRNA 克隆经过慢病毒包装系统包装后,可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非 …
阅读更多 »病毒载体的基本元件
反转录病毒载体 最常用的反转录病毒载体基于Mo -MLV 。第一代载体所携带的转基因的两侧是2 个完整的LTR, 由增强子(U3) 、R 区(即转录起始区,在病毒颗粒中的载体基因组两端均存在)及U5 区构成。病毒载体的包装主要由包装信号序列(ψ)介导,而邻近的gag序列能够显著提高其包装效率。所有反转录病毒载体均携带一个ψ甲序列和部分gag 序列组成的扩展包 …
阅读更多 »病毒包装过程中,细胞大量死亡,还有必要收集病毒吗
在病毒包装过程中,如果观察到细胞大量死亡,是否还要收集病毒需要根据具体情况判断。以下是一些可能的考虑因素: 病毒滴度:尽管细胞大量死亡,仍然有可能产生高滴度的病毒。如果病毒滴度足够高,可以继续收集病毒用于后续实验。 污染:细胞大量死亡可能是由于污染引起的。如果怀疑有细菌、真菌或支原体污染,收集病毒可能不是一个好主意,因为污染会影响后续实验的准确性。 病毒本身 …
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