病毒感染增强

pShuttle 质粒被用来将携带的目的基因转移到腺病毒载体骨架中。步骤1 ~9 阐述了将目的基因克隆到有双筛选系统的pSh-pkGFP 质粒中。目前在使用的pShuttle 或pSh-pkGFP 中包含一个CMV 启动子驱动的表达盒，，可以用来克隆外源基因或替换启动子。1. 在无菌的05mL 离心管中将外源基因载体和pSh-pkGFP 载体分别用以下条件消 …

一、原理 腺病毒(Adenovirus，Ad)是一种无包膜的线状双链DNA病毒，其复制不依赖于宿主细胞的分裂。有近50个血清型，大多数Ad载体都是基于血清型2和5，通过转基因的方式取代E1和E3基因，降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在高水平表达E1和E3基因的细胞中复制，因此是一种适用于治疗的高效控制系统。 二、特点 1） 几乎可以感染所有类型的细胞 2） …

慢病毒纯化工艺，依据其纯化原理主要分为超速离心、密度梯度离心、PEG离心、超滤、切向流、离子交换层析等方法。当前主要的慢病毒纯化均是由上述中的一种或几种方法组合在一起完成。 对于大部分的细胞感染以及普通的动物实验来说，推荐使用超速离心方法对慢病毒进行浓缩。超滤过程中留下的细胞碎片会导致细胞毒性，直接影响病毒的应用。   病毒上清/粗纯病毒 科研级慢病毒 科研 …

慢病毒感染后未能实现敲降的原因可能有多种。以下是一些可能的原因及其解释： 慢病毒包装质量问题： 病毒滴度较低，导致感染效率不高，可能无法有效转导目标细胞。 病毒颗粒中没有足够的有效载体，影响敲降效果。 靶向序列设计问题： shRNA或sgRNA设计不合理，没有有效靶向目标基因的序列。 目标序列与基因组其他部位的相似性导致脱靶效应，影响敲降效果。 感染条件不佳 …

病毒转染原理及步骤   在细胞相关的实验操作中，对于一些按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞，通过病毒介导的实验能够大大提高基因的转导效率，以达到目的基因的高效瞬时表达。   病毒转染包括以下步骤：1构建载体 2包装提纯病毒 3感染靶细胞。以慢病毒为例。 慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起 …

在病毒包装过程中，如果观察到细胞大量死亡，是否还要收集病毒需要根据具体情况判断。以下是一些可能的考虑因素： 病毒滴度：尽管细胞大量死亡，仍然有可能产生高滴度的病毒。如果病毒滴度足够高，可以继续收集病毒用于后续实验。 污染：细胞大量死亡可能是由于污染引起的。如果怀疑有细菌、真菌或支原体污染，收集病毒可能不是一个好主意，因为污染会影响后续实验的准确性。 病毒本身 …

目的基因不能直接整合到大多数真核细胞，常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞，从而得到表达满足实验需求。病毒有很多种，常见的有慢病毒和腺病毒。关于慢病毒和腺病毒的原理以及特别前面的文章中都有介绍过，可以搜索关键字查看。今天主要介绍病毒感染细胞的实验流程。 1.构建目的基因到载体 构建手段 一般是根据原始质粒信息确定克隆方案，有以下两种手段。 1）如果原始 …

病毒表达系统 腺病毒(Adenovirus) 慢病毒(Lentivirus) 腺相关病毒(Adeno-As sociate virus) 病毒基因组 双链DNA病毒 RNA病毒 单链DNA病毒 复制 条件复制 不可复制 条件复制 滴度 最高可达1012pfu/ml 最高可达109TU/ml 最高可达1012-13v.g/ml 感染细胞类型 感染分裂和不分裂细 …

慢病毒感染后，细胞不生长可能有多种原因。以下是一些常见的原因和解决方法： 病毒滴度过高： 原因：高滴度的慢病毒可能导致细胞毒性，使细胞无法正常生长。 解决方法：降低病毒的滴度，进行一系列稀释实验，找到一个既能有效转染又不影响细胞生长的滴度。 细胞状态不佳： 原因：感染前细胞的健康状态可能影响感染后的生长。 解决方法：确保细胞在最佳状态下进行感染，例如在感染前 …

病毒载体最常用的有遍在启动子(ubiquitous promoters) 、细胞类型特异性启动子和多聚腺苷酸化信号。 遍在启动子• 人类CMV 立即早期启动子• 小鼠干细胞病毒(MSCV) 启动子• CMV 增强子与鸡β-actin 启动子融合的CAG 杂合启动子（也称为CGA 、CBA 或CB ；在不同版本中的长度不同）• 人类EF-α• 人类磷酸甘油酸激 …