英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
此分析方法基于用[3H] －胸腺嘧啶脱氧核苷标记核DNA, 用玻璃纤维滤器获得样品。 凋亡产生的DNA 片段小到可以通过玻璃纤维滤器，因此特定样品的放射活性减少。很显然，这种分析对循环的细胞是必需的。 实验前一天，将细胞接种于新鲜培养基。对数生长期细胞可更好地掺入[3H]－胸腺嘧啶脱氧核苷。 收获细胞，在新鲜培养基中以1×106细胞／ml重悬，用5 …
阅读更多 »siRNA转染实验步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …
阅读更多 »shRNA转染实验步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下shRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …
阅读更多 »细胞转染的方法有哪些？
1. 脂质体法。中性脂质体是利用脂质膜包裹DNA，借助脂质膜将DNA导入细胞膜内。带正电的阳离子脂质体则不同，DNA并没有预先包埋在脂质体中，而是带负电的DNA自动结合到带正电的脂质体上，形成DNA-阳离子脂质体复合物，从而吸附到带负电的细胞膜表面，经过内吞被导入细胞。脂质体法始于1987年，此法的出现使得转染效率、转染的稳定性和可重复性大大提高。阳离子脂质 …
阅读更多 »如何长期维持你的细胞株？
给养 （给予新鲜的培养基） ，细胞生长过程中会消耗培养基中的某些必需因子，必须更换培养基。 分瓶 （传代、细胞数批减少），细胞数量不断增长，超出容器和培养基的负荷。（PS: 培养和传代是同时进行的，很难只进行一个而不进行另一个操作。） 冻存 细胞株都必须分装冻存样品。可以作为备用，防止细胞表型的漂变 …
阅读更多 »细胞培养的无菌技术
微生物无处不在，它们造成污染的可能性也处处存在。细胞培养成功操作最基本的要点是：任何与细胞接触的物品必须是无菌的或没有污染的。要解决培养过程中的污染问题是一件繁琐的、令人沮丧的、没有成功把握的工作，因此，最好的策略就是防止微生物污染的发生。 方案 1 无菌技术 无菌技术在理论上是很简单的：阻止无菌的、未被污染的物质或物品与任何有菌的、被污染的物体相接触。成功 …
阅读更多 »PBMC细胞可以用电转染吗
PBMC细胞（外周血单个核细胞）可以通过电转染（electroporation）进行基因转染。然而，由于PBMC细胞包括T细胞、B细胞、单核细胞和NK细胞等多种类型，且这些细胞对电转染的敏感性和效率存在差异，电转染PBMC细胞需要特定的优化。 一些关键的注意事项包括： 电转染参数：PBMC电转染的参数（如电压、脉冲时间和次数）需要根据细胞类型进行优化。通常， …
阅读更多 »病毒感染的细胞与未感染的对照细胞相比，在相同浓度的嘌呤霉素（puromycin）处理下，病毒感染的细胞死亡更多的原因
这种现象可能由以下几个原因引起： 病毒感染对细胞的影响： 病毒感染（例如慢病毒载体的感染）会对细胞造成一定的压力，可能导致细胞的代谢、增殖状态和基因表达发生变化。即使是没有病毒基因组整合的病毒颗粒也可能激活细胞的应激反应、免疫反应，或者影响细胞的健康状态，从而导致细胞更容易受到药物（如嘌呤霉素）的影响并死亡。 病毒颗粒的毒性： 某些病毒载体本身可能具有一定的 …
阅读更多 »怎样做好siRNA细胞转染实验
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …
阅读更多 »贴壁细胞的分瓶操作步骤
1.从细胞单层吸出培养基。2. 缓慢加入37’C 温浴的PBS 或不含血清的培养基，让培养基沿容器壁流下，注意不要滴在细胞上，以免冲掉附着不牢的细胞。3. 再吸出PBS 或培养基。4. 加入含0.25 ％胰蛋白酶的PBS, 加入蜇以刚刚没过细胞为宜。5. 立即吸去胰蛋白酶，停留在细胞上的时间为10 ~ 30s(可以用不含血清的旧培养基多洗细胞几次 …
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