使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时Hela细胞的电转染条件是: 对于0.2 cm电转杯,细胞密度为3×10^6 cells/ml,DNA用量为2μg,电转液体积为100μl,电压为130V, 电容为950μF。 对于0.4 cm电转杯,细胞密度为3×10^6 cells/ml,DNA用量为5μg,电转液体积为250μ …
阅读更多 »怎样提高悬浮细胞的siRNA转染效率?
悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面,在培养液中呈悬浮状态生长,如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染,其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。 目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂,脂质体转染是基于电荷吸引原理,先形成 …
阅读更多 »DEAE-葡聚糖介导的转染:高效率的转染方法
DEAE -葡聚糖介导的转染与磷酸钙共沉淀介导的转染在三个方面有重要的不同。第一,该方法用于克隆基因的瞬时表达,而不是细胞的稳定转化(Gluzman 1981 ) 。第二,该方法对BSC-1 、CV- 1 和COS 等细胞系非常有效,但对许多其他类型的细胞转染效果不理想。第三, DEAE-葡聚糖转染的DNA 用量比磷酸钙共沉淀转染少。采用0.1 ~ 1.0μ …
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