细胞培养

细胞培养的质量好坏是细胞相关实验的基石，许多朋友都曾经历过因为细胞污染影响实验进度的郁闷，被老板批评是小事，要是影响到正常毕业就是大事了。怎么分辨细胞污染，是不是细胞污染？是那种细胞污染？细胞污染后如何处理？ 预防污染 细胞培养是个细致活儿，一不小心就会造成污染，最好养成良好无菌操作习惯。个人经验是，进实验室之前最好洗手，很多实验者都不bother，这是国人 …

由于心血管系统发病率、病死率高，严重威胁人类生命，随着心血管疾病研究的不断深入，以体外培养的血管平滑肌细胞作为研究模型，在心血管疾病，特别是在动脉粥样硬化研究中的应用越来越广泛。 （一）材料与设备 1. 设备超净工作台、离心机、水浴锅、CO2 培养箱、－70 ℃ 冰箱，－20 °C:冰箱。2. 无菌材料培养皿、止血钳、15ml 离心管、刻度吸管、弯头吸管、T …

细胞生长时的表型会发生改变或漂变，所以细胞必须计数，计数后应马上冻存。 冷冻细胞前 检查冷冻细胞所需试剂和器具是否备齐。 确认有无菌的可用于冷冻的冻存管 。 确认液氮罐里是否有冻存细胞的位置。 冷冻细胞 将培养基中的细胞培养至对数生长期。 进行活细胞计数，不要冻存死细胞比例高达20％以上的细胞。 决定冻存量，安排需要几个冻存管。 冻存细胞在融化时要稀释10 …

在筛选 shRNA 细胞系后，如果你发现 RNA没有变化，但 蛋白水平减少，可能有多种原因。这里有一些可能的解释： 1. 转录后调控（Post-transcriptional regulation） miRNA或其他RNA调控：尽管shRNA能够靶向mRNA并降解其转录产物，细胞内可能存在 miRNA 或其他转录后调控机制（如RNA结合蛋白）影响 mRNA …

一、支原体污染 识别支原体污染。这是一种很难发现却经常存在的问题。支原体是最小的(0. 3μ.m)能够自我复制的有机体，倒置显微镜下通常观察不到。支原体没有细胞壁，对常用的抗生素不敏感。支原体感染是极为不易察觉的，可能直到出现了可以观察到的病变或发现细胞正常功能丧失的时候，才意识到是发生了支原体感染。 不采用特殊的染色方法，也没有观察到病变但是实验总是不成功 …

PCR 法是20 世纪80 年代中期建立起来的一种体外DNA 扩增实验，其基本原理是酶促DNA 合成反应，即在DNA 模板、引物和脱氧核糖核酸存在下，经DNA 聚合酶的作用，使DNA 链扩增延伸。该实验具有灵敏度高、特异性强、检测快速的特点，但其对实验环境要求严格， 实验成本较高， 有时还会出现假阳性的现象。 （一）材料与设备 支原体PCR 检测试剂盒、dN …

  alkphos 碱性磷酸酶 amp 氨苄青霉素 AMVRT 鸟类粒细胞病毒反转录酶 ANOVA 方差分析 BAC 细菌人工染色体 β-gal  β－半乳糖苷酶 Bis  N, N’－亚甲双丙烯酰胺 bp 碱基对 BPB 溴酚蓝 BSA 牛血清白蛋白 CAT 氯霉素乙酰转移酶 cDNA 互补DNA cfu 菌落形成单位 CMC 临界微囊浓度 C …

大多数实验室使用抗生素，但是如果无菌操作技术掌握得很好，抗生素其实也不是必需的。多数抗生素在37°C 时的半衰期都很短，培养基内实际的抗生素浓度要比你以为的低。 细胞培养所用的抗生素通常以干粉形式保存，使用前用无菌水或其他溶剂将其溶解，得到的抗生素溶液可以不需要再进行过滤除菌。 细胞培养的两种标准抗生素 庆大霉素，储存液浓度5-10 mg/ml, 工作浓度为 …

划痕实验是一种简单易行的检测肿瘤细胞运动的方法， 实验成本低， 可以用来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力。 （一）材料与设备 6 孔板或者培养皿， 10 μl 或者200μl 无菌的枪头， Marker 笔，直尺。 （ 二）操作步骤 1. 先用Marker 笔在6 孔板背后，用直尺比着，均匀地划横线，每隔0.5-1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5 条线。 …

随着免疫细胞生物学和分子生物学的快速发展,免疫治疗已成为肿瘤患者放、化疗和手术后辅助治疗的重要手段之一。 过继免疫治疗(adoptive cellular immunotherapy,ACI)是近年来引起关注的免疫治疗方法。ACI 是通过将具有抗肿瘤活性,能直接或间接介导抗肿瘤效应的免疫细胞注肿瘤宿主体内的一种治疗方法。ACI 应用的免疫细胞主要为 T 细胞 …