细胞培养

一、细胞培养瓶、培养皿和培养板 目前，细胞培养已很少使用传统的玻璃制品，如玻璃卡氏培养瓶、玻璃离心管、玻璃试剂瓶，而多数使用一次性的塑料制培养瓶、塑料制离心管及塑料制移液管等，而且这些物品的规格也较丰富，如培养瓶T25、T75 、T150、T175 （阿拉伯数字表示培养面积），现在还出现了培养袋、普通培养板（有不同孔径的，如 6 孔、12 孔、24 孔、48 …

体外培养细胞的功能表达（分化） 由于体外细胞培养的过程是不断选择具有分裂增殖能力细胞群的过程，所以细胞群一直处于变化中。体外的细胞培养物逐渐会变为处于动态平衡的由多能干细胞、未分化的定向前体细胞和成熟细胞组成的细胞群体，并且，这种平衡可随着环境条件变化而改变。在细胞密度较低的情况下，连续传代可促进细胞增殖、限制细胞分化，而高细胞密度、低血清和合适的激素条件， …

体外培养细胞传代规范的建立 细胞从原代培养时开始，就要建立细胞传代常规，即最好依据严格的时间表进行传代等操作，这样可以保持和监控细胞的增殖行为。若到了适合的时间，细胞还没有达到足够高的密度（即细胞没有彼此汇合），那么应增加接种密度：相反，若细胞很快彼此汇合，则应降低接种密度。理想的细胞浓度是使细胞每3~4d 更换培养液，每7d 传代。常规传代使细胞可重复标准 …

小鼠大脑皮层神经元原代培养步骤： 1、  于无菌条件下切取鼠头并以75%酒精浸泡1min，解剖出完整鼠脑； 2、  预冷解剖液中分离去除软膜、血管、取大脑皮质漂洗，用眼科剪将皮质反复剪切成碎块； 3、  移入培养皿中，吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2m1，37℃培养箱中消化30min； 4、&nb …

随着各型肝炎、肝硬化、肝癌等慢性肝病的发病率日益升高，体外培养的肝细胞也被广泛地用千肝病基础研究中。尽管细胞培养技术不断改进和成熟，国内外也先后建立了多株人肝癌细胞系，但体外分离和培养人正常肝细胞仍是非常有价值的研究材料。 （一）材料与设备 1. 设备与器材   超净工作台、离心机、CO2 培养箱、－70℃ 冰箱、－20℃冰箱。2. 无菌材料   大培养皿、 …

基质凝胶培养是研究细胞与细胞、细胞与基质之间相互作用的重要方法，如细胞运动性、肿瘤细胞的侵袭转移能力的研究。现在应用最广泛的凝胶为I 型鼠尾胶原，其他还有纤维蛋白胶原、血浆胶原等。 （一）材料与设备 胶原凝胶I (collagen I) 、完全培养液、培养皿（直径35mm)、吸管、移液枪、CO2 培养箱。 （二）操作步骤 1．用完全培养液调节胶原凝胶的浓度为 …

培养基可用来有意识地从混合细胞群体中筛选特定性质的哺乳动物细胞。 材料 脾细胞与骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞(10: 1) 含10 ％胎牛血清 的RD 培养基 4X10-5mol/L 氨基喋呤(A 液；用0. 1mol/L NaOH 配制成100 倍浓缩液） 1X10-5mol/L 次黄嘌呤／ 1. 6 X 10-3 mol/L 胸腺嘧啶脱氧核苷，双蒸水配制( …

培养细胞一经污染，多数较难处理。如果污染细胞价值不大，宜弃之；在寻找原因后彻底消毒操作室，复苏或重新购置细胞，再培养。 若污染细胞价值较大，又难于重新得到，可采取以下办法清除。 一、细菌和真菌的清除 　　1、使用抗生素 　　抗生素对杀灭细菌较有效。联合用药比单独用药效果好。预防用药比污染后再用药效果好。预防用药一般用双抗生素，污染后清除用药需采用大于常用量5 …

大多数实验室使用抗生素，但是如果无菌操作技术掌握得很好，抗生素其实也不是必需的。多数抗生素在37°C 时的半衰期都很短，培养基内实际的抗生素浓度要比你以为的低。 细胞培养所用的抗生素通常以干粉形式保存，使用前用无菌水或其他溶剂将其溶解，得到的抗生素溶液可以不需要再进行过滤除菌。 细胞培养的两种标准抗生素 庆大霉素，储存液浓度5-10 mg/ml, 工作浓度为 …