病毒感染

根据病毒的TCID50值计算给毒的MOI（Multiplicity of Infection，感染倍数）通常需要几个步骤。MOI 是指每个宿主细胞上平均感染的病毒颗粒数。 步骤概述： 知道病毒的TCID50值：TCID50 是一种病毒活性的度量，表示每单位体积（通常为每毫升）病毒悬液中，能在 50% 的细胞文化中引起感染的病毒数量。单位通常是病毒颗粒数/毫升 …

在慢病毒感染的实验中，通常的做法是，在感染后24小时更换培养液，目的是去除未吸附的病毒和残留的病毒介质，避免对细胞的毒性影响。更换培养液后，细胞会继续培养，通常会保持培养在常规的全培液中。 对于延长观察时间的问题，感染后72小时一般是观察慢病毒感染效果的一个标准时间点，因为大多数慢病毒的转导效率在72小时内达到峰值。尽管感染后24小时更换培养液，但并不意味着 …

实验准备 目标细胞：选择适合慢病毒感染的细胞株（如 HEK293T 或靶细胞）。 病毒稀释：对病毒原液进行一系列梯度稀释（如 10−1，10−2，10−3，10−4）。 感染细胞：将稀释后的病毒感染到目标细胞中，确保设置对照组（未加病毒）。 培养：培养 48-72 小时（根据病毒系统和荧光/抗性蛋白表达时间调整）。 检测方法：检测报告基因表达水平（如荧光蛋白 …

在AAV病毒感染实验中，TU/mL（转导单位每毫升，Transduction Unit per milliliter）和vg/mL（病毒基因组拷贝数每毫升，Viral Genome copy per milliliter）是两种常见的病毒滴度单位。它们表示的是病毒浓度的不同方面： TU/mL：代表的是真正具有转导能力的AAV颗粒的数量，也就是能够在宿主细胞中 …

通常，在计算滴度时，我们会选取某个稀释度的特定数据（如阳性细胞数），但这个数据往往是复孔的平均值，或者用于确认某个稀释度的数据是否可靠。因此，虽然计算公式中可能未直接体现复孔的作用，但复孔实际上已经在前期数据处理中起到了关键作用。 总结：复孔的作用是提高数据的稳定性和准确性，即使计算滴度时没有直接体现，实际上已经通过平均值计算、异常值排除等方式间接影响了最终 …

在慢病毒滴度测定的倍比稀释实验中，设置复孔主要有以下几个作用： 提高实验数据的可靠性由于生物实验存在一定的随机误差，复孔可以减少实验数据的偶然性，提高测量的准确性和重复性。 计算平均值，减少误差即使计算滴度时可能未直接用到每个复孔的数据，而是取某个稀释度下的阳性孔（如GFP阳性细胞数或抗生素筛选存活细胞数），但通常会计算复孔的平均值，以降低误差。 观察实验一 …

慢病毒滴度较低，通常需要较高的 MOI（如 20）才能有效感染，而正常病毒滴度较高，合适的 MOI 可能为 0.1。要将两者放在一起进行比较，可能需要考虑以下因素： 实验目的： 如果关注的是相同数量的感染细胞，可以根据感染效率调整 MOI，以保证相似的感染率。 如果关注的是病毒自身的感染特性，可能需要分别选择最佳 MOI 进行单独实验，再综合分析。 病毒载量 …

1.提前一天细胞铺板 提前一天种植细胞，以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。 感染实验 ⑴将EnvirusTM-LV用无血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成增强剂稀释液。 ⑵将病毒浓缩液用无血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成病毒稀释液。 注：由于病毒浓度情况不同，具体病毒浓缩液用量酌情依据 …

细胞类型： 不同细胞系对慢病毒的感染效率不同。例如，一些细胞对病毒更敏感，需要更低的病毒量和细胞密度。 敏感细胞系（如HEK293T）：种植密度可稍低； 难感染细胞系（如原代细胞）：需要更高密度。 病毒滴度： 如果病毒滴度高，细胞密度可以稍低。 如果病毒滴度较低，建议适当提高种植密度，并配合 增强试剂（如Envirus-LV） 提高感染效率。 LV感染目标： …

1.提前一天细胞铺板 提前一天种植细胞，以感染时细胞融合度在50%左右为宜(悬浮细胞根据需要调整，不要采用过高的细胞密度)。 感染实验 ⑴将EnvirusTM-LV用无血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成增强剂稀释液。 ⑵将病毒浓缩液用无血清稀释液稀释(用量参见下表)，充分混匀，制成病毒稀释液。 注：由于病毒浓度情况不同，具体病毒浓缩液用量酌情依据 …