细胞生物学

        血清中含有大量的蛋白质，在转染过程中，带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附，影响转染效率。另外，使用脂质体等转染试剂时，由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞，引发细胞毒性，导致转染效率降低，故不能有血清转染。这些转染试剂要求在转染前换无血清培养基，转染后4-6h在更换成有 …

1.   电场强度要合适 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2.   细胞状态要好 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2 …

将细胞样品与台盼蓝染料混合。活细胞排斥染料，而死细胞被染成深蓝色。将细胞铺在血球计数器的玻板上，显微镜下进行人工计数。 一、材料 血（球）计数计（改进的Neubauer 型），每次用后洗净并晾干。（也可以用其他计数器，只是格子不同。） 血（球）计数计的盖玻片（可重复使用），每次用后洗净并晾干。 含0.4% (W/V) 台盼蓝的PBS 。 计数器 悬浮好的细胞 …

一、试剂 CaCl2 溶液( 2mol/L )、完全培养基、DMEM 培养基、乙醇（或异丙醇） (70% )、胎牛血清( FBS )、HBS 溶液(2X)、HEPES (2.5mmol/L, pH 7.3)、OptiMEM+ 1 ％青霉素／链霉素( P/S )、OptiMEM , 无P/S、pCMVDΔR8.91 质粒、pUMVC 质粒、pVSV- G 质粒 …

  alkphos 碱性磷酸酶 amp 氨苄青霉素 AMVRT 鸟类粒细胞病毒反转录酶 ANOVA 方差分析 BAC 细菌人工染色体 β-gal  β－半乳糖苷酶 Bis  N, N’－亚甲双丙烯酰胺 bp 碱基对 BPB 溴酚蓝 BSA 牛血清白蛋白 CAT 氯霉素乙酰转移酶 cDNA 互补DNA cfu 菌落形成单位 CMC 临界微囊浓度 C …

1）优化条件：质粒不同，所转染的细胞不同及定量的准确性等因素会导致在一些情况下所做的转染不在该优化条件内。这种情况下需要对质粒转染试剂的配比进行优化。另外，可选用更合适的转染试剂，如Entranster试剂。 2）抑制剂：不要在用于制备DNA-转染试剂复合物的培养基中使用抗生素，EDTA，柠檬酸盐，磷酸盐，RPMI，硫酸软骨素，透明质酸，硫酸葡聚糖或其他硫酸 …

体外培养细胞的增殖特点 从培养时开始，培养物可从组织块培养的外迁细胞中获得，也可通过酶消化或机械方法分散组织获得。不管采用何种方法获得细胞，原代培养是一系列细胞选择过程的第一步，其最终结果是产生一个相对均一的细胞系。细胞从组织块培养中迁移出来的能力是选择的条件之一； 而对分散的细胞来说，只有那些在离散后黏附到了培养器皿底面上生存下来的细胞， 或悬浮时能存活的 …

是的，藻类细胞和动物细胞电转所用的仪器通常有一些区别。具体来说，电转仪器的选择和设置参数会因细胞类型的不同而有所不同，以下是一些主要的差异： 1. 电转仪器的类型 藻类细胞通常会选择高压短时脉冲电转仪，因为藻类细胞多有细胞壁，且结构较坚硬，需要较高的电压来突破细胞壁，使 DNA 进入细胞。 动物细胞（尤其是哺乳动物细胞）一般选择低压长时脉冲电转仪，因动物细胞 …

所有的转染实验均应包括对照，以检验各个试剂和制备的质粒DNA , 以及检测将要引入的基因或构建体的毒性。 瞬时表达的对照 阴性对照 在瞬时转染实验中，需要用载体DNA 和/或用于稀释待测质粒或基因的缓冲液转染一两个培养皿的细胞。通常采用鲑鱼精DNA 或用于构建重组体的空载体等其他惰性载体代替待测基因转染贴壁细胞。转染后，培养的细胞不应从培养皿上脱落，外观上也 …

真核细胞通常悬浮在带有血清和冷冻剂的培养基内，保存在-196°C 的液氮中。如果是商业订购的，通常储存在用干冰包裹的冻存管中。所以冻存后的细胞必须快速解冻后立即培养，以获得最大的生存能力，为了除去冻存时的添加剂， 24 小时后要更换培养基。 一、材料 培养基， 37’C 预热 培养瓶 装有70 ％乙醇的烧杯 1ml 、10ml 的移液管、移液器及 …