慢病毒感染效率低,尽管用胶体金测试显示滴度很高,可能有以下几个原因: 病毒颗粒质量:虽然胶体金检测显示病毒滴度很高,但这并不意味着所有的病毒颗粒都是功能性的。有可能病毒颗粒已经失活或者结构受损,无法有效感染目标细胞。 病毒浓度与效价的差异:胶体金检测主要测量病毒颗粒的数量,但这些颗粒不一定都具有感染性。有效感染的病毒颗粒(感染性单位)可能比实际检测的数量要低 …
阅读更多 »如何制作石蜡切片(H.E.对染法)?
一、实验原理: 石蜡切片是最基本的切片技术,冰冻切片和超薄切片等都是在石蜡切片基础上发展起来的。苏木素与伊红对比染色法(简称H.E.对染法)是组织切片最常用的染色方法。这种方法适用范围广泛,对组织细胞的各种成分都可着色,便于全面观察组织构造,而且适用于各种固定液固定的材料,染色后不易褪色可长期保存。经过HE染色,细胞核被苏木素染成蓝紫色,细胞质被伊红染色呈粉 …
阅读更多 »免疫共沉淀超详细操作步骤
一、准备工作 预冷PBS,RIPA Buffer,细胞刮子(用保鲜膜包好后,埋冰下),离心机 二、操作步骤 用预冷的PBS洗涤细胞两次,最后一次吸干PBS; 加入预冷的RIPA Buffer(1ml/107个细胞、10cm培养皿或150cm2培养瓶,0.5ml/5×106个细胞、6cm培养皿、75cm2培养瓶) 用预冷的细胞刮子将细胞从培养皿或培养瓶上刮下, …
阅读更多 »亲和层析纯化抗体,请问纯化后收集到的抗体溶液,加甘油或者醇类,糖类的话,浓度一般是加多少
在亲和层析纯化抗体后,通常需要添加稳定剂以保护抗体免受降解。常见的稳定剂包括甘油、糖类(如蔗糖或海藻糖)、以及醇类(如乙醇)。添加这些稳定剂的目的是增加抗体的稳定性,特别是在长期保存或反复冻融过程中。以下是常用稳定剂的添加浓度建议: 1. 甘油 (Glycerol) 甘油常用于抗体溶液的冷冻保存,以防止冰晶形成和蛋白质变性。推荐添加浓度为: 最终浓度:10- …
阅读更多 »包埋剂的配制及注意事项
1. 包埋剂的配制 (1) 配方Ⅰ : 环氧树脂618 10 ml 十二烷基琥珀酸酐(DDSA) (硬化剂) 5 ml 甲基内次甲基二甲酸酐(nadic methyl anhydride, MNA) (硬化剂) 8 ml 苯二甲酸二丁酯(DBP) (增塑剂) 3 ml 2, 4, 6-三(二甲氨基苯酚) ( DMP-30) (加速剂) 0. 2 ml (2) …
阅读更多 »免疫组化实验结果的判定原则和分析标准
免疫组化实验结果的判定和分析,就实验结果而言,免疫组化技术主要涉及抗体实验结果的描述与分析、图片的确定与选取、相关数据的提供。 免疫组化结果的判定原则: ⒈必须同时设对照染色。没有对照染色的免疫组化染色结果是不可信的。 ⒉抗原表达必须在特定部位。如LCA应定位在细胞膜上;CK应定位在细胞浆内;PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内;EMA应定位在细胞膜上等等。 …
阅读更多 »电镜包埋剂应该具备哪些特征?
理想的电镜包埋剂(electron microscopic embedding media) 应具有以下性质:黏度低,易透入,聚合均匀,聚合后体积收缩小,能耐受电子轰击,高温下不变形,对细胞成分提取少,精细结构保存良好,在电镜的高倍放大下,不呈现可见结构,有良好的切割性能,有适当的反差,对人体无害等。但实际上,现在所用的各种包埋剂都各有利弊。 包埋剂的种类很 …
阅读更多 »PI染色与流式细胞术
流式细胞术(flow cytometry, FCM)是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。 流式细胞术目前已广泛地被应用于免疫学基础研究和逐步进入临床应用各方面,用流式细胞仪对细胞表面的抗原成分进行标记分析,可区别多种细胞的特性,为细胞免疫的研究增加了有效的手段和帮助。 流式细胞术最大的特点是能在保持 …
阅读更多 »免疫共沉淀经验总结分享
免疫共沉淀:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整的细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间结合的保持下来。 免疫共沉淀主要是用来研究蛋白质与蛋白质相互作用的一种技术,其基本原理是,在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体,孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Pansobin珠上的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA),若细胞中有正与兴趣蛋白结合的目的蛋白,就可以形成这样一种复合物:“ …
阅读更多 »石蜡包埋法如何选择石蜡?
石蜡包埋法是组织学制片中最常用的方法、石蜡(paraffin)是由石油中分离出来的一种甲烷, 系固体碳化氢, 呈蜡样半透明的结晶块状。切片用石蜡应选优质的品种, 要纯而透明, 并有适当黏性。根据熔点的不同,有软蜡和硬蜡之分,软蜡的熔点为52~56°C ,硬蜡为60~62°C 。在室温高时用硬蜡,室温低时用软蜡;薄切片宜用硬蜡, 厚切片宜用软蜡。新蜡内含气体, …
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