英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
材料 SP2/0-Ag14 骨髓瘤细胞系（药物标记的非分泌型； ATCC) 添加10mmol/L HEPES 和1mmol/L 丙酮酸钠的DMEM- 10 和DMEM-20 完全焙养基 免疫的实验动物：小鼠、大鼠或仓鼠（在初次接种后10~14d 备用) 50% （m/V) PEG 溶液，无菌 DMEM 完全培养基，未添加血清 氯化铵溶液： 0. 02mol/ …
阅读更多 »动物基因组DNA的提取
实验原理 在EDTA和SDS等去污剂存在下，用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提，可以得到哺乳动构基因组DNA，用此方法得到的DNA长度为100-150 kb，适用于构建基因组文库和 Southern分析。 通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤，以及相对分子质量较大的DNA的琼脂糖凝胶电泳技术。 仪器、材料与试剂 (一)仪器 1 . 台式离心机 2 …
阅读更多 »western-blot实验成功要点
1. 样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2. 凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝胶的 …
阅读更多 »亲和层析纯化抗体，如何减少洗脱后中和沉淀的出现？
随着亲和层析技术的发展，蛋白纯化技术相对简单，蛋白纯化技术的应用也越来越普遍，一步亲和层析即可达到90%以上的纯度。然而，蛋白纯化的过程中各个环节不容忽视。样品处理，纯化介质的选择，纯化方法的考虑，等等，虽然纯化方法简单，但是蛋白不同，采用的纯化体系也不尽相同。只要达到最终的纯化目的就是最好的纯化方法。 对于亲和层析纯化抗体，不论是蛋白A/G还是特异性抗原亲 …
阅读更多 »实验室最常用的移液枪你用对了吗？
移液枪对我们医药生物研究人员来说是最熟悉不过了。可是，你真正了解它吗？你的使用方式是正确的吗？相信不少人听到这个问题后，已经开始回想自己平时的操作，也有一部分人在认真考虑答案了吧。细节决定成败，今天在这里跟大家普及一下移液枪的使用规程，希望对大家以后的实验有帮助。 一、移液枪的使用规程 1. 移液枪的放置 移液枪要放在支架上 2. 样品准备 要求液体温度与吸 …
阅读更多 »质粒DNA细胞转染实验效率影响因素有哪些？
质粒DNA细胞转染实验效率影响因素有以下几方面： 1， 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果：超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多，特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟，相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质 …
阅读更多 »移液过程中的无菌操作
使用可重复使用的玻璃移液管 可重复使用的移液管通常放置在金属桶中。要用于细胞或细菌实验，移液管必须用棉花塞住。 将小桶的盖子拧松（用左手的最后两个手指打开和夹住。） 左手拿住小桶，右手卸掉盖子。 用火烧一下盖子和小桶的开口处，把盖子放在小桶的旁边。 左手水平拿好小桶，轻轻摇动， 使一两根移液管的头部露出一点，方便抓取。 取出一根移液管，把小桶放好。拿出移液管 …
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