分子生物学

1.完全基因组 在去年5月发表的预印本中，人类共有基因组序列 GRCh38 添加了近 2 亿个新碱基对，并撰写了人类基因组的最后一章。 GRCh38 于 2013 年首次发布，一直是一个有价值的工具，但也存在漏洞。主要是因为测序技术产生的读数准确但较短。它们的长度不足以明确地绘制出高度重复的基因组序列，包括覆盖染色体末端的端粒和在细胞分裂过程中协调新复制的 …

Northern 杂交可以揭示小RNA 的表达水平，同时也可揭示小RNA 的长度，并且是小RNA 验证和定量的标准。然而， Northern 杂交不能用来检测低丰度小RNA, 也不能检测大量的小RNA 种类。相比之下，定量RT-PCR 更加敏感并且可以适用于高通量处理（图1) 。 图1 小RNA 定量RT-PCR 分析流程图。 试剂 mirVana miRN …

双脱氧法或酶法利用DNA 聚合酶合成单链DNA 模板的互补拷贝，这一方法最先由F. Sanger 及其合作者发展而来。DNA 聚合酶不能起始DNA 链的合成，而是在复性于“模板“DNA 的引物的3 ‘端上进行链的延伸（图1) 。链的延伸是在引物生长端的3′ 羟基掺入脱氧核糖核苷酸。双脱氧测序法利用了DNA 聚合酶能以2′, …

近些年来，随着PCR 技术的出现，以及DNA 克隆和测序方法的发展，对大量质粒载体和重组子的需求也大大减少。因此，本方案曾一度广泛应用，但已经被更为快速和简便的柱纯化方法代替。在本方案中，通过碱裂解法的放大( Bimboim and Doly 1979 ) ，质粒DNA 可从清亮的细菌裂解物中通过含有溴化乙锭的CsCl 梯度离心来进行纯化。 无论是高拷贝数的 …

长链dsRNA 的导入能够在小鼠卵母细胞、早期胚胎、胚胎干细胞和胚胎癌细胞( Svoboda et al. 2000; Wianny and Zemicka-Goetz 2000; Billy et al. 2001; Yang et al. 2001)，以及植物、蠕虫、果蝇体内诱导特定和高效的RNA 干扰。但是，早期在哺乳动物体细胞中用长链dsRNA 诱导 …

过敏性疾病是一个持续存在的临床挑战，治疗选择有限。因此，找到一种治疗过敏原的方法、改善过敏性疾病的技术尤为重要。 2022年1月17日，美国INDOOR生物技术公司的研究团队在《Frontiersin Allergy》杂志上发表了一篇题为 New Frontiers: Precise Editing ofAllergen Genes Using CRISPR …

DNA胶用来分离、确定或者纯化DNA片段。用于DNA测序反应的测序胶不在这儿讨论。每位实验室成员有不同的制胶方法。 样品准备 6 X 上样缓冲液： 30% (V/V) 甘油， 0.25%(W/V) 溴酚蓝， 0.25% (W/V) 二甲苯腈蓝，蒸馏水配制。贮于－20’C 。 样品缓冲液与DNA在60’C 温育5 分钟。 标准分子／分子 …

1. 无Ct值出现 检测荧光信号的步骤有误: 一般SG法采用72℃延伸时采集，Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。 引物或探针降解: 可通过PAGE电泳检测其完整性。 模板量不足: 对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。 模板降解: 避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。 Ct值出现过晚（Ct>38） 扩增效率低: 反应条 …

有很多关于离心机类型的描述性术语，但那些不是严格的定义。在实验室中，离心机通常以制造者的名字相称。 高速与超速离心机都带有冷冻装置，之所以需要冷冻是因为高速离心会产生热。其他离心机有带或不带冷冻装置的型号。 台式离心机， 也称为多用途离心机。不一定放在实验台上，反而经常放在桌子底下。 用途：沉淀细胞与细菌、酚抽提。 g 值与每分钟旋转次数： 角式17000 …

此方案概述了一个快速定量DNA 的方法，并同时分析其物理状态。溴化乙锭染色后，用UV 灯照射透视法可以发现包含＞5ngDNA 的DNA 条带。CCD 照相机拍下未知样品的影像，然后与一系列已知含量标准品进行强度（灰度）对比，从而估计未知样品中DNA的含量。染色凝胶分析是一种快速的同时测量DNA 的数量并分析其物理状态的方式。 SYBR 染料也可用于染色并大致 …