2025年 3 月 15日, 星期六
新闻

核酸基因

用测序酶进行标记/终止测序反应常见问题

问题 可能的原因 解决办法 四条泳道同一个位置都有条带,特别是靠近引物的地方 DNA 模板不纯 观察对照DNA 是否存在同样问题,如果不存在,重新制备模板DNA 试剂不纯或试剂老化;dNTP量不足 准备新鲜试剂 DNA 聚合酶活性低 使用新鲜制备的酶。 加入更多的酶,如每个反应多加4 倍。使用前再稀释酶. 将标记反应缩减至2 min, 将T7DNA 聚合酶从 …

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揭秘RNAi,缔造实验神话

用siRNA进行transient transfection不稳定,几代细胞以后,症状就会消失,所以在转染几天(1-3)后要立刻抽提蛋白,进行分析。 用质粒中的shRNA进行转染,如果质粒含有抗生素位点,可以进行筛选,获得较稳定的细胞株系,但需要时间较长 用病毒中的shRNA进行感染(infection),抗生素筛选后,可以获得很稳定细胞株系。 瞬时RNAi …

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RNAi、miRNA及siRNA的区别和联系

RNA干扰 (RNAi):近年来的研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰(RNAi)。 MicroRNA(miRNA,微RNA): …

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体外转录法制备dsRNA中,怎么知道mRNA的靶区域在哪

在体外转录法制备dsRNA(双链RNA)的过程中,确定mRNA的靶区域是关键的一步。以下是一些常用的方法和步骤,以帮助确定mRNA的靶区域: 1. 目标基因的选择 首先,确定你想要抑制或研究的目标基因。你需要有这个基因的完整序列信息(通常从基因数据库中获得,如NCBI)。 2. 设计siRNA或shRNA序列 设计小干扰RNA(siRNA)或小发夹RNA(s …

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荧光原位杂交会用到哪些试剂?

一、实验材料、试剂、仪器耗材: 人的MyoD1(MYF3)基因探、人外周血中期染色体细胞标本指甲油、甲酰胺、氯化钠、柠檬酸钠、氢氧化钠、吐温20等恒温水浴锅、培养箱、染色缸、载玻片、Nikon E-400荧光显微镜、盖玻片、封口膜、200μL移液器、暗盒等 二、相关溶液的配制 (1)20×SSC:175.3 g NaCl,88.2 g柠檬酸钠,加水至1 00 …

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测序胶的灌制、电泳及处理

推荐用6 %丙烯酰胺、非梯度胶为起点。可使用两种胶:一种在相对短的时间获得较短的寡核苷酸信息;另一种是用较长时间以使较长的寡核苷酸得到最大限度的分离。这两种凝胶分离过程,采用6 %丙烯酰胺,可以从一套测序反应中获得300~350 个碱基的序列信息。另一种可选的方案是使用两种不同浓度的胶,使较短片段和较长片段的寡核苷酸得到最大限度的分离。 材料 盛于喷射洗瓶的 …

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反转录定量PCR 分析小RNA

Northern 杂交可以揭示小RNA 的表达水平,同时也可揭示小RNA 的长度,并且是小RNA 验证和定量的标准。然而, Northern 杂交不能用来检测低丰度小RNA, 也不能检测大量的小RNA 种类。相比之下,定量RT-PCR 更加敏感并且可以适用于高通量处理(图1) 。 图1 小RNA 定量RT-PCR 分析流程图。 试剂 mirVana miRN …

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实时荧光定量PCR为什么倍受青睐?

一、 实时荧光定量PCR技术是一种新型的科学定量方法,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。   该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,目前已得到广泛应用。 二、 目前,荧光定量PCR所使 …

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分子生物学常用贮存液的配制

分子生物学常用贮存液的配制 1.30%丙烯酰胺溶液 【配制方法】将29g 丙烯酰胺和1g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。加热至37℃溶解之,补加水至终体积为100ml。用滤器(0.45μm 孔径)过滤除菌,查证该溶液的pH 值应不大于7.0,置棕色瓶中保存于室温。 【注意】丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性。称 …

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