英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
分子克隆最基础的操作可能就是核酸纯化了。去除蛋白质的关键步骤经常是简单地利用酚：氯仿和氯仿把DNA 从水相中萃取出来。这种萃取可在进行一步法克隆操作前有效灭活和去除蛋白酶。然而，如果是从复杂分子混合物如细胞裂解液中纯化DNA 时，则需要更多的检测。在这些情况下， 一般是在用有机溶剂萃取前，利用蛋白质水解酶如链霉菌蛋白酶或蛋白酶K （表1 ) 去除大部分蛋白质 …
阅读更多 »实验室最常用的移液枪你用对了吗？
移液枪对我们医药生物研究人员来说是最熟悉不过了。可是，你真正了解它吗？你的使用方式是正确的吗？相信不少人听到这个问题后，已经开始回想自己平时的操作，也有一部分人在认真考虑答案了吧。细节决定成败，今天在这里跟大家普及一下移液枪的使用规程，希望对大家以后的实验有帮助。 一、移液枪的使用规程 1. 移液枪的放置 移液枪要放在支架上 2. 样品准备 要求液体温度与吸 …
阅读更多 »缺口翻译标记DNA
下面程序描述了使用修饰染料核苷酸，用同步DNA 切割通过缺口翻译制备荧光DNA，缺口翻译是通过摸索修饰dUTP 和dTP 的荧光素或花青的最佳条件完成的(Keller 1993; Yu et al. 1994; Zhu et al. 1994) 。该方法对用四甲基罗丹明、德克萨斯红、香豆素和bodipy 修饰的核苷酸可能也适用，但染料的类型、接头、核苷酸以及 …
阅读更多 »PCR 标记DNA
PCR 是通过热稳定酶，在模板、dNTPs 和一组与片段3′ 序列互补的引物存在下，对插入物进行次序扩增(Saiki et al. 1988) 。PCR 技术提供的另一优势是在对插入片段的扩增中掺入修正的核苷酸，因此可以生产出不含载体的标记的探针，这排除了在其他方法如缺口翻译所导致的对载体序列的非特异性标记。 目前已有掺入生物素化核苷酸的方法(L …
阅读更多 »DNA 的 PCR 扩增
一、 PCR反应体系的组成 1.PCR扩增缓冲液： 50mM KCl10mM Tris HCl( pH8.0)1.5mM MgCl2 2.寡核苷酸引物：是按已知待扩增的DNA 片段序列进行设计，用 DNA合成仪合成。引物序列应位于DNA片段的保守区，两条引物间应注意不要有 …
阅读更多 »离心的种类和原理
离心方法主要有两种：制备型（用来分离某些颗粒）和分析型（用来了解分离颗粒的物理性质）。 分子或细胞生物学实验室中所作的决大多数离心机属于制备型离心机，而多数常规制备型离心是差速离心。 g 力和每分钟旋转次数(rpm) 是大略的值：取决于所用的离心机型号和转子。 差速离心（沉淀） 原理：样品在一定速度下离心，分成上清部分与沉淀部分。样品根据沉降速度不同得到分离 …
阅读更多 »体外转录法制备dsRNA
该方案是简单而且得到广泛应用的、利用PCR 模板制备双链RNA 的体外转录反应。该方法制备的dsRNA 可以用于在某些细胞或者组织中诱发RNA 干扰。 试剂 琼脂糖凝胶( 1 %)复性缓冲液( 10 X)ATP 、CTP 、GTP 、UTP （ 每种100mmol/L )二硫苏糖醇( DTT ) ( 1mol/L)DNA 分子质量标准dNTP 混合液，每种1 …
阅读更多 »南京中医药大学：忍冬苷靶向EZH2减轻溃疡性结肠炎通过自噬介导NLRP3炎性体失活
结肠巨噬细胞内NLRP3炎症小体的异常激活与溃疡性结肠炎的发生发展密切相关。虽然靶向NLRP3炎症小体被认为是一种潜在的治疗方法，但其调节肠道炎症的潜在机制仍存在争议。 2021年3月9日，发表于Acta Pharmaceutica Sinica B（影响因子11.413）的一篇题为Lonicerin targets EZH2 toalleviate ulc …
阅读更多 »双脱氧法DNA 测序常见问题
问题 可能原因 解决方法 放射自显影片空白 DNA 聚合酶失活 标记物太旧 用对照引物、模板及试剂进行试验 试剂太旧 替换缺陷试剂 不正确或有缺陷的引物 不正确或有缺陷的模板, 曝光失误（如保留了保鲜膜，凝胶对着胶片的背面等 改正错误 整张放射自显影片太亮／标记物掺入不足 标记物太旧 采用新标记物 酶活性太低 采用 …
阅读更多 »体外转录法制备dsRNA中，怎么知道mRNA的靶区域在哪
在体外转录法制备dsRNA（双链RNA）的过程中，确定mRNA的靶区域是关键的一步。以下是一些常用的方法和步骤，以帮助确定mRNA的靶区域： 1. 目标基因的选择 首先，确定你想要抑制或研究的目标基因。你需要有这个基因的完整序列信息（通常从基因数据库中获得，如NCBI）。 2. 设计siRNA或shRNA序列 设计小干扰RNA（siRNA）或小发夹RNA（s …
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