小干扰RNA(siRNA)是通过RNA干扰(RNAi)在体外和体内抑制特定蛋白质合成的有力工具,由于RNAi利用天然途径,即在蛋白质翻译发生之前,在转录后水平上关闭基因表达,因此,siRNA诱导下调基因表达对基础研究和应用研究有着巨大的影响。siRNA及其递送系统的化学修饰已被建议用于改善细胞内siRNA递送和药代动力学性质。现分享一篇体内转染(Entran …
阅读更多 »DNA转染(Entranster)与核受体Nur77和脂肪酸氧化及黑色素瘤细胞研究
脂肪酸氧化(FAO)是细胞获得ATP和NADPH来克服代谢应激的关键。然而,脂肪酸氧化(FAO)在肿瘤中调节的机制仍不清楚。现分享一篇DNA转染(Entranster)与核受体Nur77和脂肪酸氧化及黑色素瘤细胞研究的文献,以供参考。
阅读更多 »RNA转染与非连接蛋白Cx32在宫颈癌细胞中作用的研究
缝隙连接蛋白(Cx)构成脊椎动物的缝隙连接(GJ),可调节重要的细胞过程,包括电耦合,增殖,分化和凋亡。与最初在上世纪60年代提出的“接触增长抑制”概念一致,GJ和CX被公认为肿瘤抑制;恶性肿瘤的特点是GJ的缺失。在恶性肿瘤细胞中,转染Cx以GJ依赖的方式提高放疗/化疗诱导的细胞凋亡(有毒的“旁观者效应”)。Cx在宫颈癌中的作用尚不清楚。现分享一篇RNA转染 …
阅读更多 »电转染实验中易出现的问题
1. 不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要,电场强度不能过高,过高会增加细胞的死亡率;也不能过低,过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值,实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. 细胞选择错误 用 …
阅读更多 »western-blot实验步骤
Western,也称Western blot、Western blotting、Western印迹,是用抗体检测蛋白的重要方法之一。可按照以下步骤操作。 1.收集蛋白样品(Protein sample preparation) 使用细胞裂解液,对贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品进行裂解。然后测定每个蛋白样品的蛋白浓度。 2. 电泳(Electrophoresis …
阅读更多 »细胞转染实验应避免的陷阱
细胞转染是细胞生物学和分子生物学的一种常用的技术手段。而转染效率低下却是实验人员经常遇到的问题,尤其是原代细胞转染,转染难度更大。现分享几个细胞转染实验常见的几个陷阱,望实验人员能够注意。 1.准备不足 做细胞转染的时候,在开展正式实验前要多做预试验,优化转染条件。优化转染条件包括:转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。 2.细 …
阅读更多 »细胞转染实验的方法有哪些?
1. 电穿孔法。通过短暂的高电场电脉冲处理细胞,沿细胞膜的电压差异会导致细胞膜的暂时穿孔。DNA被认为是穿过孔扩散到细胞内的。电脉冲和场强的优化对于成功的转染非常重要,因为过高的场强和过长的电脉冲时间会不可逆地伤害细胞膜而裂解细胞。理论上说电穿孔法可用于各种细胞,且不需要另外采购特殊试剂,但需要昂贵的电转仪。此法每次转染需要更多的细胞和DNA,因为细胞的死亡 …
阅读更多 »细胞DNA转染效率影响因素
1, 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果:超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多,特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟,相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如果你的质粒正好比较大,又没有经验,选择特别注明可以转大质粒的转染试剂成功几率会高一些。有的转染试剂还会提供一些 …
阅读更多 »体内转染(Entranster)与放射增强质粒DNA转染肿瘤研究
迄今为止,大多数基因治疗临床试验都使用了病毒载体,但仍存在多种担忧,包括致癌风险、急性免疫原性、广泛的组织亲嗜性、DNA包装能力有限,以及安全处理和大规模生产的挑战。对于将基因疗法转化为临床治疗来说,改进这些缺点的DNA传递的替代方法是至关重要的。现分享一篇体内转染(Entranster)与放射增强质粒DNA转染肿瘤研究的文献,以供参考。
阅读更多 »ECL发光液(enlight)与香烟烟雾提取物接触后平滑肌细胞的增殖研究
动脉粥样硬化是发病率和死亡率的主要原因。动脉粥样硬化的特点是血管平滑肌细胞(SMCs)过度增殖,是多种因素联合作用的结果。流行病学调查表明,吸烟与动脉粥样硬化密切相关,在血管平滑肌细胞(SMC)的过度增殖起着关键性作用。现分享一篇ECL发光液(enlight)与香烟烟雾提取物接触后平滑肌细胞的增殖研究的文献,以供参考。
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