英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
悬浮细胞的siRNA转染操作步骤，以24孔板siRNA转染为例 1.提前1天细胞种植 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那么就用2×105的细胞进行转染。 2.转染过程 ⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA，加入一定量无血清稀释液，充分混匀，制成RNA稀释液，终体积为25μ …
阅读更多 »如何提高qPCR反应的灵敏度与特异性？
1. 首先确定模板RNA完整性好，无DNA污染。 2. RNA模板中不应含有扩增反应抑制剂。 3. 为了防止模板降解，在反应体系中加入RNase抑制剂RNasin。 4. 使用适量的模板RNA，模板量太多会降低特异性，太少会导致扩增不出条带或条带太弱。 5. 若模板中有二级结构，可通过提高逆转录反应温度来提高扩增效果。 6. 设计引物时，避免在引物3’端含有 …
阅读更多 »siRNA细胞转染效率低下的原因
1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 2. 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这 …
阅读更多 »体内转染（entranster）与蛛网膜下腔出血后早期脑损伤研究
钠/氢交换因子1（NHE1）在生理条件下维持中枢神经系统（CNS）的细胞内PH（phi）稳态中起着重要作用，并与脑缺血引起的神经元死亡和细胞内Na离子和Ca离子超载有关。然而，其在蛛网膜下腔出血（SAH）诱发的早期脑损伤（EBI）中的作用和潜在机制尚未得到充分探讨。现分享一篇体内转染（entranster）与蛛网膜下腔出血后早期脑损伤研究的文献，以供参考。 …
阅读更多 »体内转染（英格恩）与非小细胞肺癌放射敏感性研究
由于环境污染和烟草的持续消费，肺癌已成为男性和女性癌症死亡的最常见原因。肺癌分为两类：小细胞肺癌和非小细胞肺癌。在所有肺癌患者中，非小细胞肺癌占80%-85%。放疗技术已成为70%非小细胞肺癌患者缓解疼痛和梗阻性症状等亚临床疾病的主要治疗方法。与小细胞肺癌相比，非小细胞肺癌对放射治疗的抵抗力更强，逆转这种抵抗力是临床医师目前面临的挑战之一。 现分享 …
阅读更多 »DNA转染（entranster）与基因载体的膜亲和力研究
在基因治疗中，核酸的有效转染依赖于基因载体的作用。这些载体保护核酸免受人体循环系统中核酸酶的降解，并将遗传物质作为治疗疾病的基因药物导入靶细胞。 一个有效的基因载体应该能够压缩目标基因，将其导入所需的宿主细胞，释放遗传物质，并使其与基因组结合。在基因转染过程中，基因载体对细胞膜的亲和力是与其转染效率密切相关的一个关键参数。 现分享一篇DNA转 …
阅读更多 »浅析细胞转染效率低下的原因
影响细胞转染效率低下的原因主要有： 1、细胞太少或细胞密度太大 细胞密度对转染效率有一定的影响。不同的转染试剂，要求转染时的最适细胞密度各不相同，即使同一种试剂，也会因不同的细胞类型或应用而异。转染时过高或者过低的细胞密度会导致转染效率降低，乃至表达水平偏低。因此如果选用新的细胞系或者新的转染试剂，最好能够进行优化实验并为以后的实验建立一个稳定方法，包括适当 …
阅读更多 »体内转染（entranster）与fbxw5减少可减轻脊髓损伤研究
外伤性脊髓损伤（SCI）是造成死亡和终身残疾的主要原因。然而，对脊髓损伤的病理过程还没有完全了解。F-BOX/WD重复序列包含蛋白5（FBXW5），是scf型E3泛素连接酶复合物的一个亚单位，在调节各种病理方面具有重要作用。然而，对于fbxw5对SCI进展的影响知之甚少。 现分享一篇体内转染（entranster）与fbxw5减少可减轻脊髓损伤 …
阅读更多 »体内转染（entranster）与Trim47调节脑缺血再灌注损伤研究
脑缺血是导致死亡和长期残疾的主要原因。Tripartite Motif-47（Trim47）是Trim家族蛋白的一员，据报道参与了各种疾病的细胞凋亡和炎症。然而，trim47在脑缺血/再灌注（I/R）损伤中的潜在分子机制仍不清楚。现分享一篇体内转染（entranster）与Trim47调节脑缺血再灌注损伤研究的文献，以供参考。 文献地址：https://sc …
阅读更多 »如何提高悬浮细胞的转染效率？
悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染，其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。 目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂，脂质体转染是基于电荷吸引原理，先形成脂质体-DNA复合物，散布在细胞周 …
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