1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …

1.        样品质量。所抽取样品的蛋白含量，蛋白变性是否充分等等，还有，蛋白样品的PH值是否在7~8之间。这会直接影响到样品浓缩的效果。此外，蛋白样品是否降解、目的蛋白是否已抽取充分都会对最终结果的可靠性有影响。 2.        凝胶质量。不连续SDS-PAGE胶对凝 …

1.如为贴壁生长细胞，一般要求在转染前一日，必须应用胰酶处理成单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，转染当日的细胞密度以70-90%（贴壁细胞）或2×106-4×106细胞/ml（悬浮细胞）为宜，最好在转染前4h换一次新鲜培养液。 2.用于转染的质粒DNA必须无蛋白质，无RNA和其他化学物质的污染，OD260/280比值应在1.8以上。 3.培养基中的血清 在开 …

1.        选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2.        细胞的选择 用 …

影响细胞转染效率低下的原因主要有： 1、细胞太少或细胞密度太大 细胞密度对转染效率有一定的影响。不同的转染试剂，要求转染时的最适细胞密度各不相同，即使同一种试剂，也会因不同的细胞类型或应用而异。转染时过高或者过低的细胞密度会导致转染效率降低，乃至表达水平偏低。因此如果选用新的细胞系或者新的转染试剂，最好能够进行优化实验并为以后的实验建立一个稳定方法，包括适当 …

       白血病在全球发病率呈上升趋势，我国白血病发病率为十万分之三，每年约新增40 000 例患者。白血病表现为骨髓造血组织恶性增生，形成大量异常的白细胞，广泛浸润组织器官，引起多种组织器官不可逆损害，直接威胁患者生命。白血病的转移、复发与白血病细胞及其生长微环境相互作用密切相关。免疫毒素是一种由抗体或细胞因子与化学毒素耦合组成的融合蛋白。通过受体介导 …

       蛋白质-蛋白质相互作用的合理设计是创造新型蛋白质药物、诊断探针或调节细胞信号通路的有力工具。SH3和PDZ结构域等小型模块化支架在调节蛋白质相互作用中起着重要作用，因此这些结构域在蛋白质设计中的应用已被广泛研究。De novo蛋白质设计为工程定制蛋白质功能提供模板，为合成生物学研究提供正交蛋白质相互作用网络。已经开发出各种计算方法来引入已知蛋白 …

      角膜移植术是治疗致盲性角膜疾病的唯一方法。虽然角膜移植被认为是最常见和最成功的移植手术，但角膜移植的成功率低于一般预期。根据临床统计，88%的角膜移植片在移植后能存活1年，但只有55%的角膜移植片能存活5年。三分之一的角膜损伤是由免疫移植反应引起的。此外，高危受者角膜移植的成功率在35%以下，抑制角膜移植排斥反应是提高移植成功率的主要挑战。现分享 …

      胰岛素抵抗与低度炎症状态密切相关，其特征是胰岛素在骨骼肌和脂肪组织中的葡萄糖吸收和肝葡萄糖生成方面的功能受损。幽门螺杆菌已感染世界50%以上的人口，其感染与全身慢性炎症密切相关。胃是幽门螺杆菌感染的主要部位，可引起胃炎、胃溃疡甚至胃癌。然而，幽门螺杆菌感染在周围组织中的作用尚不清楚。流行病学研究表明，幽门螺杆菌感染患者血糖调节受损，2型糖尿病（t …

      胆汁淤积症是一种由胆汁形成或分泌障碍引起的具有毒性胆汁酸滞留的临床综合征。各种肝病由胆汁淤积发展而来，包括胆道闭锁、原发性硬化性胆管炎和原发性胆汁性肝硬化。石胆酸（lca）是一种有毒、疏水的二级胆汁酸，主要由鹅去氧胆酸的细菌7α-去氢氧化作用在肠道内形成。胆汁淤积症患者的LCA水平升高。LCA处理后的啮齿类动物可发生胆汁淤积和肝损伤，因此大鼠已被 …