方法 表达 细胞毒性 细胞类型 注释 优势 劣势 瞬时 稳定 脂质体介导方案1 可 可 可变 贴壁细胞,原代细胞系,悬浮培养体系 阳离子脂质与带负电荷的DNA 结合, 有的形成人工膜囊泡(脂质体)。产生的稳定阳离子复合物吸附并融合于带负电荷的细胞膜( Feigner et al. 1987, 1994 ) 免疫原性和细胞毒性低;可使用大质粒, 安全风险低,操 …
阅读更多 »转染方法的选择取决于哪些因素?
转染方法:将基因导入真核细胞的方法可分为三类:生化方法转染、物理方法转染、病毒介导的转导。 转染方法的选择取决于下列几个实验要素: .最终目的是基因表达还是蛋白质生产 .采用的细胞类型(贴壁细胞或悬浮细胞,适应培养的细胞或原代细胞) .细胞系抵抗转染压力的能力 .采用的筛选方法的类型 .培养条件 .转染的核酸种类( DNA 、RNA 、siRNA 或寡核菩酸 …
阅读更多 »英格恩RNA体内转染产品相关文献清单
采用RNA体内转染试剂EntransterTM– in vivo发表的文献,研究方向包括大脑、神经、脊髓、眼睛、鼻、口腔、心脏、支气管、肺部、胃、胰、肝脏、肠、骨、肌肉、肾脏、膀胱、乳腺、生殖系统、胸膜、免疫系统、皮肤等各个方面。欢迎大家阅览与交流。 序号 研究方向 实验材料 文章题目 期刊 大脑 点击此处,打包下载所有大脑相关文献,提取码:btv9 1 大 …
阅读更多 »英格恩DNA体内转染产品相关文献
采用DNA体内转染试剂EntransterTM– in vivo发表的文献,研究方向包括大脑、支气管、肺部、肝脏、胰腺、肠、骨、肌肉、免疫系统等方面。欢迎大家阅览与交流。 序号 研究方向 实验材料 文章题目 期刊 大脑 点击此处,打包下载所有大脑相关文献,提取码:v6at 1 脑损伤 DNA Rbfox-1 contributes to CaMK …
阅读更多 »RNA 定量-紫外(UV) 分光光度法
在进行大多数RNA 分析之前, RNA 定量是一种重要和必需的步骤。RNA 定量方法可以分为两类:紫外(UV) 分光光度法,此方法基于嘌呤和嘧啶碱基的吸收光谱; 基于荧光染料的方法,结合到核酸时选择性发荧光,测定荧光染料的强度。如果RNA 样品是纯的( 如没有诸如蛋白质、酚、琼脂糖或其他核酸的污染),用UV 分光光度法测量被碱基吸收的UV 射线简单而且精确。 …
阅读更多 »微型凝胶电泳后使用溴化乙锭(EB)估算条带中DNA 数量
此方案概述了一个快速定量DNA 的方法,并同时分析其物理状态。溴化乙锭染色后,用UV 灯照射透视法可以发现包含>5ngDNA 的DNA 条带。CCD 照相机拍下未知样品的影像,然后与一系列已知含量标准品进行强度(灰度)对比,从而估计未知样品中DNA的含量。染色凝胶分析是一种快速的同时测量DNA 的数量并分析其物理状态的方式。 SYBR 染料也可用于染色并大致 …
阅读更多 »一步法同时提取细胞或组织中的DNA 、RNA 和蛋白质
本方案(Chomczynski1993) 可以从部分组织或细胞中同时提取RNA 、DNA 和蛋白质。像它的前身(Chomczynski and Sacchi 1987) 一样,此方法涉及用异硫氰酸胍和苯酚的单相溶液裂解细胞。加入氯仿产生第二(有机)相,从而DNA 和蛋白质被抽提,而RNA留在水相上清中。有机相中DNA 和蛋白质的分离,通过按顺序用乙醇、异丙醇 …
阅读更多 »利用有机溶剂分离纯化高分子质量DNA
分子克隆最基础的操作可能就是核酸纯化了。去除蛋白质的关键步骤经常是简单地利用酚:氯仿和氯仿把DNA 从水相中萃取出来。这种萃取可在进行一步法克隆操作前有效灭活和去除蛋白酶。然而,如果是从复杂分子混合物如细胞裂解液中纯化DNA 时,则需要更多的检测。在这些情况下, 一般是在用有机溶剂萃取前,利用蛋白质水解酶如链霉菌蛋白酶或蛋白酶K (表1 ) 去除大部分蛋白质 …
阅读更多 »丁醇抽提法浓缩核酸
用仲丁醇( 2 -丁醇)或正丁醇( 1 - 丁醇)等溶剂萃取水溶液时,部分水分子会进入有机相,而核酸依然留在水相。重复抽提几次后可显著减少核酸溶液的体积。这一浓缩方法可用于减少稀溶液的体积,以使核酸易于通过乙醇沉淀得到回收。 试剂 DNA 样品 异丁醇 方法 计算核酸溶液体积,在2 5 °C 下加入等量的异丙醇。轻微、充分混匀两相。 加入过多的异丙醇 …
阅读更多 »异丙醇法沉淀DNA
DNA 在含有异丙醇的溶液中比在含有乙醇的溶液中难溶。乙醇沉淀法需要2 ~ 3 倍体积的乙醇,异丙醇沉淀则需要0.6 ~ 0.7 倍的体积。沉淀大体积溶液中的DNA 时,异丙醇是比较好的选择。在室温用异丙醇沉淀减少了一些蔗糖或者氯化钠和DNA 发生共沉淀的现象。但异丙醇还是有一些不足之处: 盐在35 %的异丙醇溶液中比在65 %的乙醇溶液中难溶。 DNA 沉 …
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