免疫共沉淀:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整的细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间结合的保持下来。 免疫共沉淀主要是用来研究蛋白质与蛋白质相互作用的一种技术,其基本原理是,在细胞裂解液中加入抗兴趣蛋白的抗体,孵育后再加入与抗体特异结合的结合于Pansobin珠上的金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA),若细胞中有正与兴趣蛋白结合的目的蛋白,就可以形成这样一种复合物:“ …
阅读更多 »免疫组化实验结果的判定原则和分析标准
免疫组化实验结果的判定和分析,就实验结果而言,免疫组化技术主要涉及抗体实验结果的描述与分析、图片的确定与选取、相关数据的提供。 免疫组化结果的判定原则: ⒈必须同时设对照染色。没有对照染色的免疫组化染色结果是不可信的。 ⒉抗原表达必须在特定部位。如LCA应定位在细胞膜上;CK应定位在细胞浆内;PCNA及p53蛋白应定位在细胞核内;EMA应定位在细胞膜上等等。 …
阅读更多 »Western blot 中Tween-20的作用是什么?应该怎么用?
Western blot的洗液TBST是实验室常用的配制液体,对于TBST的配方也基本上相残不多,其中配方中就有一种组分是Tween-20,一种黄色或琥珀色澄明的油状液体,具有特殊的臭气和微弱苦味。用移液枪吸取时会有一种滞后感。为什么在Western blot的洗液TBST中要加入这么一种试剂,Tween-20在Western blot 中在发挥什么样的作用 …
阅读更多 »研究揭秘人类为何是灵长类中的胖子(灵长类,倭黑猩猩,肌肉)
濒危类人猿倭黑猩猩与黑猩猩一起被称为现存的、与人类最接近的“近亲”。它们每天大部分时间是在枝头攀爬、采集果子和树叶。相形之下,早期人类则常常需要穿越炽热贫瘠的土地,而这种生活方式的不同似乎揭示了人类最终演变成灵长类中多脂肪、少肌肉的物种的原因。 过去30年间,两位研究者对13具圈养倭黑猩猩的尸体进行了分析研究,并比对了之前收集到的49具人类遗体的数据。他们发 …
阅读更多 »siRNA转染常见问题及解决方案
1. RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记,决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件,建议先进行预实验优化。 RNA浓度和转染试剂量的优化(24well) 1 2 3 4 RNA工作浓度 25nM 50nM 100nM 150nM 每孔RNA的量(pmol) 0.17μg(12.5pmol) 0.33μ …
阅读更多 »新型核酸分子荧光探针——分子信标的原理及应用
分子信标(molecular beacon)是一种具有发夹结构的新型荧光标记核酸探针,具有高灵敏度、高特异型,其在聚合酶链反应(PCR)、核酸序列的分析、活细胞内核酸的动态检测、蛋白质(酶)与核酸的相互作用等方面具有广泛的应用。 分子信标的结构 分子信标的结构一般包括三个部分:环状区、信标茎干区、荧光基团和猝灭基团。荧光基团一般联接在信标分子的5 端;猝灭基 …
阅读更多 »导师再也不用担心我的体内转染实验了
EntransterTM-in vivo是英格恩生物公司(Engreen Biosystem Co,Ltd.)最新研发合成的用于动物体内转染的转染试剂。 作用原理: EntransterTM-in vivo体内转染试剂,通过纳米技术合成,非脂质体,通过物理作用与核酸结合,浓缩包裹核酸,从而保护核酸免受免疫系统破坏,并通过物理作用将核酸富集在细胞表面,增强核酸 …
阅读更多 »Real-Time qPCR常见的八大问题分析
1. 无Ct值出现 检测荧光信号的步骤有误: 一般SG法采用72℃延伸时采集,Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。 引物或探针降解: 可通过PAGE电泳检测其完整性。 模板量不足: 对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。 模板降解: 避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。 Ct值出现过晚(Ct>38) 扩增效率低: 反应条 …
阅读更多 »手势与手语的神经处理
一项研究提示,手语和手势可能是被人类大脑的不同神经系统处理的。尽管手语和手势都传达了符号含义,但它们被认为在根本上是有区别的。 为了比较参与处理手语和手势的神经系统,Aaron Newman及其同事在一项测试中招募了19名先天性耳聋的美国手语(ASL)母语使用者与19名有听力的非手语英语母语使用者,这项测试的目的是在受试者观看非语言手势、美国手语(ASL)关 …
阅读更多 »实验Figure的制作中需要注意哪几点?
统计图(Figure)是用图形将统计资料形象化,利用线条高低、面积大小代表数量,通俗易懂,比文本与统计表更便于理解和比较。 在科技论文中,应根据资料的类型及表达目的选用合适的统计图。例如,对不同性质分组资料进行对比时可选用直条图,说明事物各组成部分的构成情况可用圆形图或百分直条图,用于表达连续性资料频数分布可用直方图,为表明一事物随另一事物而变化的情况选用线 …
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