英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
为了达到高的转染效率，在转染实验过程中，需要注意以下几点： 1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致 …
阅读更多 »电转染实验过程中易出现的问题
不合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 细胞选择错误 用于电转的细胞一般选取处于对数生长期的细胞（15代以内，传代后2d）。因为处于对数生长期的细胞分裂旺盛，表面结构致密比稳定 …
阅读更多 »siRNA细胞转染实验步骤
下面以Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数是6×105，那 …
阅读更多 »体内转染（Entranster）与骨桥蛋白对肝毒性代谢调节作用研究
骨桥蛋白（OPN）是一种众所周知的促炎症分子，在对乙酰氨基酚（APAP）引起的肝毒性中已被观察到。然而，OPN诱导的精确细胞来源及其在APAP诱导的肝毒性中的作用还尚不清楚。现分享一篇体内转染（Entranster）与骨桥蛋白对肝脏毒性代谢调节作用研究的文献，以供参考。
阅读更多 »体内转染(Entranster)与富亮氨酸重复激酶2加重脑出血诱导的继发性脑损伤研究
富亮氨酸重复激酶2（LRRK2）是家族性和突发性帕金森病（PD）的遗传原因，它与神经元死亡、囊泡运输、线粒体功能障碍和炎症有关。然而，其在脑出血（ICH）引起的继发性脑损伤（SBI）中的作用尚不清楚。现分享一篇体内转染(Entranster)与富亮氨酸重复激酶2加重脑出血诱导的继发性脑损伤研究的文献，以供参考。
阅读更多 »DNA转染（Entranster）与HIV-1 TAT泛素化和羧基末端区的稳定性和活性调控研究
人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）的反转录激活因子（TAT）蛋白已知经历泛素化。然而，泛素化在调节TAT稳定性和活性方面的作用尚不清楚。 现分享一篇DNA转染（Entranster）与HIV-1 TAT泛素化和羧基末端区的稳定性和活性调控研究的文献，以供参考。
阅读更多 »体内转染（Entranster）在脑中风调控机制研究中的应用
MicroRNAs（miRNAs）是一类非编码小RNA，miRNAs能结合到靶基因mRNA的3’非翻译区诱导转录退化和/或抑制翻译。miRNA在多种病理生理过程中发挥着重要的作用。 Let-7c是最丰富且高度保守的miRNA。以往的研究表明，let-7c通过调节细胞增殖和细胞凋亡抑制癌细胞存活率。最近研究表明Let-7c是巨噬细胞极化的重要调节器。 Let- …
阅读更多 »质粒DNA细胞转染注意事项
质粒的构建：启动子的选择 启动子的选择对于转染基因的有效表达是非常重要的。对于转染过程本身虽然无甚影响，但是对转染结果却有着微妙的影响。 质粒的大小和质量 线性化还是超螺旋会影响转染结果：超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多，特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些。毕竟，相对致密、较小的外源异物被细胞内吞的几率要大一些。如 …
阅读更多 »细胞周期和细胞凋亡分析
CCAA试剂盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)是基于PI 染色(Propidium staining)方法进行细胞周期与细胞凋亡分析的试剂盒。 下面以engreen的CCAA试剂盒为例，说明一下检测方法。 1.收集并调整细胞浓度为1×106/ml，取1ml单细胞悬液进行后续操作。 1)贴壁细胞：小心吸除细胞培养液 …
阅读更多 »siRNA转染后细胞死亡是什么原因？
siRNA转染后细胞死亡，原因也是多样的，如脂质体毒性，转染浓度过高，转染前的细胞状态不佳等都可能导致转染后细胞死亡的情况发生，这种情况下就需要适当优化转染条件；可以选择细胞毒性小的非脂质体类的转染试剂，如英格恩的纳米材料的Entranster试剂，另外，如果siRNA所靶向的基因对于维持细胞生长是非常重要的，出现细胞死亡的现象可能正是由于基因干扰引起的，如 …
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