细胞转染是细胞生物学和分子生物学的一种常用的技术手段。而转染效率低下却是实验人员经常遇到的问题,尤其是原代细胞转染,转染难度更大。现分享几个细胞转染实验常见的几个陷阱,望实验人员能够注意。 1.准备不足 做细胞转染的时候,在开展正式实验前要多做预试验,优化转染条件。优化转染条件包括:转染试剂的用量、DNA密度、细胞密度、试剂和DNA混合孵育时间等等。 2.细 …
阅读更多 »RNA转染实验注意事项
1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA,推荐用玻璃纤维结合,洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸,小的寡核苷酸,蛋白和盐离子。注意:化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化(即PAGE胶纯化)。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在,如皮肤,头发,所有徒手接触过 …
阅读更多 »ECL发光液常见问题及解答2
4:Western Blot化学发光(ECL)时,胶片上条带很浓怎么办? 对ECL发光来说,可以减少发光时间和显影时间。对英格恩Enlight发光液来说,可以将压过的膜重新用TBST洗涤10min×3次后重新曝光操作。 5:Western blot化学发光(ECL)时,胶片上条带很弱怎么办? 对ECL发光来说,可适当延长曝光时间。如果还是不行,增加蛋白的上样 …
阅读更多 »ECL发光液常见问题及解答1
ECL发光灵敏度越高越好吗? A: 不是。大多数实验的蛋白浓度在pg-ng级别,用增强型的发光液就可以。比如英格恩的Enlight发光液。 2.ECL发光液为什么需要避光保存? A:因为ECL发光液里的鲁米那等发光成分很容易因为光而失活,所以需要避光保存。 3.ECL发光液多长时间容易失效,用一瓶ECL试剂,结果有差异,是否是失效了? A:早期的ECL发光也 …
阅读更多 »如何提高细胞转染实验效率?
1.选择合适的转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同,但细胞系的选择通常是根据实验的需要,因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献,通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然,最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如英格恩的纳米材料的Entranster试剂。 2.保持最佳的 …
阅读更多 »DNA转染试剂对比
由此可见,Entranster-H4000具有更好的转染效果。
阅读更多 »体内转染(Entranster)与大鼠神经细胞凋亡和神经功能受损研究
创伤性脑损伤(TBI)是导致年轻人死亡的主要原因,具有高死亡率和发病率。在TBI期间,神经元细胞死亡不仅是导致神经功能缺损最重要的因素,也是严重影响颅脑损伤患者的生活质量的一个关键因素。现分享一篇体内转染(Entranster)与大鼠神经细胞凋亡和神经功能受损研究的文献,以供参考。
阅读更多 »体内转染(Entranster)与mir-200c在乳腺癌细胞上皮间质转化中作用中研究
MirRNAs不仅参与肿瘤的形成,也与肿瘤的分化和侵袭过程有关。然而,目前检测miRNA表达的方法有很大的缺点,如侵入性和不可再生性。上皮间质转化(EMT)在肿瘤转移和耐药方面具有重要作用。现分享一篇体内转染(Entranster)与mir-200c在乳腺癌细胞上皮间质转化中作用中研究的文献,以供参考。
阅读更多 »ECL发光液(Enlight)与大鼠海马体癫痫导致的P-糖蛋白过度表达研究
脑内p-糖蛋白(P-gp)的过度表达是导致耐药性癫痫的重要因素。P-gp抑制剂由于其全身毒性而受到临床应用限制。现分享一篇ECL发光液(Enlight)与大鼠海马体癫痫导致的P-糖蛋白过度表达研究的文献,以供参考。
阅读更多 »RNA转染(Entranster)与乙型脑炎病毒和细胞凋亡研究
流行性乙型脑炎病毒(JEV)感染是一种以神经元死亡为特征的脑组织疾病。然而,人们对其基本机制知之甚少。现分享一篇RNA转染(Entranster)与乙型脑炎病毒和细胞凋亡研究的文献,以供参考。
阅读更多 »