英格恩生物技术博客 生物实验干货分享
下面以我们实验室所用的Entranster-R4000试剂为例，说一下siRNA转染步骤（24孔板） 1.提前1天细胞种植 贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。 悬浮细胞：采用对数生长期的细胞，数量为常规培养细胞数的1/3进行转染实验。如某细胞常规培养的细胞数 …
阅读更多 »如何做好siRNA细胞转染实验？
1.纯化siRNA siRNA的浓度和纯度对转染实验非常重要。为得到高纯度的siRNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致siRNA转染实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮 …
阅读更多 »体内转染（Entranster）与小鼠肺部炎症和细胞凋亡研究
急性肺损伤（ALI）与急性呼吸窘迫综合征（ARDS）是非常严重的临床症状，具有很高的发病率和死亡率。虽然关于ALI和ARDS的治疗策略和相关的呼吸生理取得了重大进展，但是其年死亡率仍然达到了40%，导致巨额的医疗成本。现分享一篇体内转染（Entranster）与小鼠肺部炎症和细胞凋亡研究的文献，以供参考。
阅读更多 »RNA转染实验注意事项
1.纯化RNA 在转染前要确认RNA的大小和纯度。为得到高纯度的RNA，推荐用玻璃纤维结合，洗脱或通过15-20%丙烯酰胺胶除去反应中多余的核苷酸，小的寡核苷酸，蛋白和盐离子。注意：化学合成的RNA通常需要跑胶电泳纯化（即PAGE胶纯化）。 2.避免RNA酶污染 微量的RNA酶将导致RNA实验失败。由于实验环境中RNA酶普遍存在，如皮肤，头发，所有徒手接触过 …
阅读更多 »电转染实验注意事项
1. 选择合适的电场强度 合适的电场强度对于电转染实验非常重要，电场强度不能过高，过高会增加细胞的死亡率；也不能过低，过低不能增加膜的通透性或在膜上形成小孔。不同细胞系具有不同的最佳场强值，实验前应测定所转染细胞系的最佳电场强度。 2. …
阅读更多 »如何有效提高细胞转染效率？
1．选择合适的转染试剂 不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。如Entr …
阅读更多 »体内转染siRNA （Entranster）的方法研究肺微血管内皮功能
小GTP酶Rab5可以控制囊泡接到的质膜蛋白运输，其在血管内皮（VE）-钙黏蛋白的内化作用功能仍然未知，血管内皮（VE）-钙黏蛋白是一种内皮特异性跨膜元件，可以调节内皮细胞的极性和屏障功能。现分享一篇应用体内转染siRNA （Entranster）的方法研究肺微血管内皮功能的文献，以供参考。
阅读更多 »体内转染（entranster）与ADAM2沉默对异氟醚诱导的认知功能障碍的影响研究
认知功能障碍包括学习、注意力和记忆力方面的缺陷，通常被认为是系统性红斑狼疮最常见和最不易理解的神经精神症状。帕金森病（PD）和阿尔茨海默病（AD）是由认知功能障碍引起的一类广为人知的疾病。轻度认知障碍通常在早期AD中表现出来。有报告表明，诸如颜色辨别缺陷等症状能够部分反映认知功能障碍。据报道，包括异氟醚在内的挥发性麻醉剂对以麻醉后认知缺陷为特征的认知功能障碍 …
阅读更多 »体内转染（entranster）与肿瘤防治药物及其应用研究
8-氧脱氧鸟苷三磷酸是一种能够在体内触发DNA突变的核苷酸。无论是在正常的代谢活动中，还是在外源性刺激下，细胞都会产生大量的活性氧和氧自由基，其中-oh是高度活性的，可以破坏生物大分子，如碳水化合物、核酸、脂类和氨基酸。现分享一篇体内转染（entranster）与肿瘤防治药物及其应用研究的文献，该文献中的发明涉及一种用于预防和治疗肿瘤的药物，尤其涉及8-氧代 …
阅读更多 »RNA转染效率影响因素
1.转染试剂 转染中要额外注意的就是转染试剂应该是确认无RNase污染的，而且也尽量避免和质粒DNA转染混用—即使试剂本身兼容DNA和RNA转染，因RNA与DNA大小不同，转染条件不同，所需的试剂也应不同，所以RNA专用的转染试剂会更好一些。比如Entranster-R试剂. 2.RNA转染时RNA的用量 RNA转染的用量必须参考RNA转染试剂说明，因为RN …
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