实验准备 目标细胞：选择适合慢病毒感染的细胞株（如 HEK293T 或靶细胞）。 病毒稀释：对病毒原液进行一系列梯度稀释（如 10−1，10−2，10−3，10−4）。 感染细胞：将稀释后的病毒感染到目标细胞中，确保设置对照组（未加病毒）。 培养：培养 48-72 小时（根据病毒系统和荧光/抗性蛋白表达时间调整）。 检测方法：检测报告基因表达水平（如荧光蛋白 …

细胞类型： 不同细胞系对慢病毒的感染效率不同。例如，一些细胞对病毒更敏感，需要更低的病毒量和细胞密度。 敏感细胞系（如HEK293T）：种植密度可稍低； 难感染细胞系（如原代细胞）：需要更高密度。 病毒滴度： 如果病毒滴度高，细胞密度可以稍低。 如果病毒滴度较低，建议适当提高种植密度，并配合 增强试剂（如Polybrene） 提高感染效率。 感染目标： 如果 …

在慢病毒感染实验中，12孔板中种植的细胞密度需要根据以下因素优化： 一般种植密度建议： 悬浮细胞： 每孔种植 1×10⁵ 至 2×10⁵ 个细胞。 贴壁细胞： 每孔种植 5×10⁴ 至 1×10⁵ 个细胞。 对于贴壁细胞，建议种植后培养 24小时，让细胞达到约 30%-50% 的汇合度（confluency），然后进行病毒感染。这种密度能确保细胞有充足的分裂 …

在基因转染实验中，共转染的两种质粒通常不一定需要选择不同的载体，但有一些情况下选择不同的载体可能会更有优势： 同源重组和重复序列问题：如果两个质粒使用相同的载体序列，可能会发生同源重组，导致质粒结构不稳定，尤其是在细菌扩增和分离时。这种情况下，选择不同载体可以降低同源重组的风险。 抗性筛选：如果需要通过抗生素筛选两种质粒，最好选择含有不同抗性基因的载体，以便 …

细胞计数是生物学研究和临床实验中常用的技术，用于确定样本中细胞的数量。根据不同的研究需要，细胞计数的方法有很多种。常见的细胞计数方法包括： 1. 显微镜计数法 显微镜计数法是最传统也是最常见的细胞计数方法，通常结合血球计数板（如 Neubauer 血球计数板）进行使用。 步骤： 将细胞悬液稀释到合适浓度。 使用血球计数板，置于显微镜下观察。 根据规则计算视野 …

在AAV病毒感染实验中，TU/mL（转导单位每毫升，Transduction Unit per milliliter）和vg/mL（病毒基因组拷贝数每毫升，Viral Genome copy per milliliter）是两种常见的病毒滴度单位。它们表示的是病毒浓度的不同方面： TU/mL：代表的是真正具有转导能力的AAV颗粒的数量，也就是能够在宿主细胞中 …

选择适合哺乳动物细胞的高效表达载体时，通常需要考虑以下几个关键因素： 1. 目标蛋白的特性 蛋白大小和复杂性：如果你的目标蛋白比较大或具有复杂的后期修饰（如糖基化、磷酸化等），你需要确保载体能支持这些修饰。哺乳动物细胞通常用于表达这种需要后修饰的蛋白。 表达水平：有些载体可以提高蛋白表达的水平。你可以根据实验需要选择一个具有高表达效率的载体。 2. 选择合适 …

用染色的方法通常是比较简单的方法。具体来说，包括以下几种： 1. 荧光染色 原理：使用荧光染料标记液体或溶液。滴入小鼠鼻腔后，液体会通过呼吸道和其他相关通道传播，标记的染料可以通过特定波长的光激发并发出荧光，从而帮助你定位液体的分布。 优点：可以实时观察染色液体的流动和分布情况，并利用荧光显微镜等设备进行成像。 常用染料：如荧光素钠（fluorescein …

根据描述，您的shRNA已经成功将转录水平（mRNA水平）敲低了90%，但蛋白水平却没有显著变化。这种情况在RNA干扰实验中并不罕见，可能由以下原因导致： 可能原因分析 蛋白半衰期较长： 有些蛋白具有较长的半衰期，即使mRNA水平显著下降，蛋白水平可能仍然稳定。这是因为已有的蛋白质分子不会立即降解，需要更长时间才能逐渐减少。 翻译后调控： 某些蛋白质可能受翻 …

一般来说，慢病毒感染时，病毒量的计算主要依据目标MOI（Multiplicity of Infection）以及当前的细胞数量。铺板后24小时的细胞数量可能会有所增加，具体情况取决于细胞的增殖速度。 如果在铺板24小时后进行感染，通常需要考虑细胞的增殖情况来调整病毒量。如果您的细胞在这段时间内大约增殖了一倍，那么可以按铺板时细胞数的两倍来计算所需病毒量，以确 …