转化细胞在软琼脂中的生长

恶性转化的细胞在许多方面不同于其相应的正常细胞，主要不同在于它们失去了接触抑制生长，获得永生性和在动物宿主体中形成肿瘤的能力。软琼脂培养可作为体外检测细胞转化和致瘤性的替代方法。

材料

• 2% (w/ v) 琼脂
• 基础营养培养基，如DMEM ，含24. 6 ％和20% (v/ v) 胎牛血清
• 单细胞悬液
• 12 孔培养板
• 15ml 聚碳酸酣锥形离心管 ，灭菌

1. 对于每一组重复孔将2. 5ml 的2 ％琼脂与9. 75ml 含24.6 ％胎牛血清的培养液混合制成含0. 375 ％琼脂、20 ％胎牛血清的培养液，各取2ml 分别注入5 支15ml 聚碳酸酷锥形离心管， 45°C 温浴。
   
   
2. 将管分开，分别在含20 % FBS, 终容积为o. 5ml 的培养基中加入50 、100 、200 、500 和1000 个细胞。再准备另一组试管为重复培养用。分别将各浓度细胞悬液与步骤1 的琼脂混合，迅速注入12 孔培养板，置于37°C 湿润的CO₂ 培养箱孵育，直至长出细胞集落。
   
   
3. 倒置相差显微镜下计数5 次倍增后至少有3 2 个细胞的集落数，计算集落形成率（形成集落的贴壁细胞百分数）。