细胞生长缓慢的原因分析

开始培养细胞后，就恨不得写好每一天的进度计划，甚至连出成果那天的日期都预估好，然而，生活总是充满了意外……

我的细胞，你为啥长的这么慢呢？？究其原因，真是丰富多彩……

如果整个实验室只有你一个人遇到这个问题……

1. 检査你所培养的细胞是否存在污染。

(a)如果培养细胞未添加抗生素（必须添加！），细胞污染则是不可避免的。

(b) 检测可能污染的途径和原因（无菌操作、细胞系污染、培养基污染）。

2 . 检査你用于培养细胞的培养基和血清。（例如：是否批次不同或厂商不同）。如果你常规使用的是粉剂或10X 储存液，而现在购买的培养基更换为IX液体。

3 . 如果问题与培养基无关，那么很可能还是细胞的问题。

(a) 复苏另一支冻存的细胞，并且与正在培养的细胞加以比较。两种细胞的培养应分开，以免在培养之初就产生污染。随后按（b)、（d)步的方法做排査：

(b) 对传代培养的细胞进行计数，并绘制生长曲线

与以前培养该细胞的资料进行比较，检查是否有下列改变：

i ) 传代时是否接种密度过低。ii) 细胞传代是否过于频繁。

iii)传代前细胞平台期是否过长。

(c) 是否更换了胰蛋白酶或其他分离剂的批号？检査批号和供货商。

(d) 是否细胞分离过程中严重损伤了细胞？应检测：

i ) 胰蛋白酶（其他消化试剂）消化时间是否过长。

ii) 消化液的浓度和活性是否过高、过强。

iii)胰蛋白酶消化时，孵筘温度是否过高。

iv) 吹打消化细胞时是否过于用力。

 v) 细胞是否对EDTA过于敏感（如果添加了EDTA)。

vi) 胰蛋白酶稀释是否有误。

但是如果不只你一个人头疼，其他人也遇到同样的闲难，那么就得检査共用的设备和试剂了。

(1)孵化箱温度和温度设定不准。

(a) 自动调温器损坏。

(b）开关孵箱门过于频繁。

(c) 孵箱门未关紧。

(d）风扇损坏造成散热不均。

(2) 孵箱湿度不能维持

(a) 水盘中未加水。

(b) 在Petri培养皿中放置一定量的PBSA，每日称重，以检査蒸发率。

(3) 孵箱的二氧化碳浓度不准

(a) 开关孵箱门过于频繁。

(b) 二氧化碳控制器出现问题。

i ) 用预先标定的培养基监测箱体内的PH。

ii) 用二氧化碳探头（carborite) 检测孵箱环境。

iii)用标准混合气重新标定零值和二氧化碳实际值。

如果排查以上原因后仍存在该问题，就需要观察实验室是否发生其他变化？与细胞培养有关的人员是否改变？

实验人员是否改变？

(1) 培养细胞人员是否发生增减

(2) 准备实验人员是否发生增减

(3) 实验人员的准备过程是否规范

(4) 实验人员是否接受过系统训练

(5) 实验空间和布局是否过于拥挤

细胞培养所需材料是否改变？

(1) 供货商改变？

(2) 细胞培养的操作过程是否有变化？

(3) 细胞培养的专用仪器设备是否完好