western-blot注意事项

• 滤纸、胶、膜之间的大小，一般是滤纸>=膜>=胶。
• 滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡，气泡会造成短路。
• 因为DEPF膜的疏水性，膜必须首先在甲醇中完全浸湿。而且在以后的操作中，膜也必须随时保持湿润（干膜法除外）。
• 滤纸可以重复利用，上层滤纸（靠膜）内吸附有很多转移透过的蛋白质，所以上下滤纸一定不能弄混，在不能分辨的情况下，可以将靠胶滤纸换新的。
• 转移时间一般为1.5 小时，( 1mA-2mA/cm2，10% gel)，可根据分子量大小调整转移时间和电流大小。
• 灌胶时尽量均匀，否则可能会出现气泡。
• 为避免出现信号低的情况，最好选用高灵敏度的发光液，如engreen的enlight发光液等。