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EntransterTM-in vivo体内转染试剂
产品介绍
EntransterTM-in vivo是英格恩生物公司（Engreen Biosystem Co,Ltd.）最新研发合成的用于动物体内转染的转染试剂。EntransterTM-in vivo动物体内转染试剂可将小片断RNA如siRNA，miRNA，mimic、inhibitor或DNA转染到动物体内，在动物体内进行RNA干扰或蛋白表达实验。
EntransterTM-in vivo试剂不是病毒，改变了病毒转染方法复杂、周期长、不稳定、花费大、安全性等诸多问题。EntransterTM-in vivo转染效率高，方法简单，无需病毒包装，直接将DNA或RNA送入目的细胞的细胞核中表达。
EntransterTM-in vivo，非脂质体，采用纳米技术合成，能耐受体内复杂的环境，不产生免疫反应。
应用范围
专用于动物体内转染，可直接转染DNA或siRNA到动物体内进行：
- 动物体内基因治疗研究
- 动物体内RNA干扰研究
- 动物体内蛋白功能研究
主要特点
- 最快3天可以得到结果，核酸+转染试剂，注射动物，完成转染。
- 肝、肾、心、肺，血液系统、神经系统、生殖系统、皮肤…成功应用。
- 可方便、快捷更换不同的小片断RNA或DNA进行动物试验。
- 方法先进，抛弃病毒，众多实验室应用，稳定可靠。
- 比使用病毒节省90%以上费用，时间缩短到3天！
使用方法简单
如图1所示，只需要将核酸和转染试剂分别稀释，混合，无需过滤，即可直接注射动物。
图1
转染效果
将EntransterTM-in vivo与Ambion in vivo siRNA(作用于凝血因子VII)和阴性siRNA通过尾静脉注射成年小鼠，2天后，取动物肝脏检测。在mRNA水平和蛋白水平观察干扰效果。见下图，图中最左侧组为对照组注射阴性siRNA为3mg/kg，后边3组为每kg动物注射阳性siRNA量分别为1mg/kg,2mg/kg和3mg/kg情况。
图2 图3
各器官转染
根据推荐用量注射EntransterTM-in vivo和Ambion in vivo siRNA（作用于Lamin A/C）和阴性siRNA到成年小鼠。注射后2天收集相应的组织，分离RNA，用qRT-PCR分析Lamin A/C基因的表达水平。图4为尾静脉结果，图5为各器官分别局部注射结果。
图4 图5
应用本产品发表的部分文献
1.Biomed Res Int. 2014;2014:898646.Trichinella spiralis excretory-secretory products protect against polymicrobial sepsis by suppressing MyD88 via mannose receptor.(免疫系统)
2.Mol Cancer. 2014 Sep 6;13(1):206.Let-7d suppresses growth, metastasis, and tumor macrophage infiltration in renal cell carcinoma by targeting COL3A1 and CCL7.(肿瘤相关研究)
3.Cell Death Dis. 2014 Aug 21;5:e1382.Amyloid-β induces NLRP1-dependent neuronal pyroptosis in models of Alzheimer’s disease.(阿尔茨海默病)
4.Neurosci Lett. 2014 Mar 11.Autophagic effect of programmed cell death 5 (PDCD5) after focal cerebral ischemic reperfusion injury in rats.(凋亡相关研究)
5.Mol Immunol. 2014 Jan 21;59(1):30-38.Inhibition of IL-2 inducible T-cell kinase alleviates T-cell activation and murine myocardial inflammation associated with CVB3 infection.(心脏疾病)
6.Biochemistry (Moscow) 2014 Jan 12.Hepatitis B Virus Can Be Inhibited by DNA Methyltransferase 3a via Specific Zinc-Finger-Induced Methylation of the X Promoter(尾静脉注射DNA研究乙肝)
7.J Biol Chem. 2013 Oct 7.Heme Oxygenase-1 Exerts a Protective Role in Ovalbumin-induced Neutrophilic Airway Inflammation by Inhibiting Response in the Immune Cells Th17.(肺过敏性哮喘)
8.Journal of Neuroimmunology 2013 Oct 8.MicroRNA-155 Modulates Th1 and Th17 Cell Differentiation and is Associated with Multiple Sclerosis and Experimental Autoimmune Encephalomyelitis.(注射miRNA研究对免疫疾病的作用机理)
9.Journal of Alzheimer’s disease:JAD 2013 Sep 18.IL12/23 p40 Inhibition Ameliorates Alzheimer’s Disease-Associated Neuropathology and Spatial Memory in SAMP8 Mice.(脑室注射siRNA研究对阿耳茨海默氏病的治疗)
10.Purinergic Signal. 2013 Jun 11.Sensory-sympathetic coupling in superior cervical ganglia after myocardial ischemic injury facilitates sympathoexcitatory action via P2X7 receptor.(舌下静脉注射siRNA干扰脊神经背根神经节受体)
11.CNS Neurosci Ther. 2013 May 3.The Involvement of Programmed Cell Death 5 (PDCD5) in the Regulation of Apoptosis in Cerebral Ischemia/Reperfusion Injury.(脑室注射siRNA研究脑缺血的凋亡机理)
12.Matrix Biol. 2013 Mar 5.Transdermal siRNA-TGFβ1-337 patch for hypertrophic scar treatment.(皮肤涂抹siRNA研究治疗皮肤瘢痕)
13.J Cereb Blood Flow Metab. 2013 Jan 9.SirT1 mediates hyperbaric oxygen preconditioning-induced ischemic tolerance in rat brain. (脑室注射siRNA研究脑缺血机理)
14.Cancer Lett. 2012 Jan 28;314(2):223-31. Epub 2011 Oct 5.NIRF is frequently upregulated in colorectal cancer and its oncogenicity can be suppressed by let-7a microRNA.(皮下肿瘤注射miRNA研究治疗结肠癌)
15.BMC Infect Dis. 2012 Aug 6;12(1):177.Short hairpin RNA targeting 2B gene of coxsackievirus B3 exhibits potential antiviral effects both in vitro and in vivo.(尾静脉注射DNA研究治疗病毒性心肌炎)
16.Curr Pharm Des. 2012 Sep 25.MicroRNAs (miRNAs) in colorectal cancer: From aberrant expression towards therapy.
17.Progress in Modern Biomedicine 2010 Sep.Anti-Virus Research on Short Double-Stranded RNA in Mouse Models with Viral Myocarditis.
英格恩动物转染试剂和病毒感染比较
| 英格恩动物转染试剂 | 病毒感染 | |
| 实验周期 | 最快3天就可以出结果 | 需要进行克隆、病毒包装等一系列实验，周期短则1个月，长则达数月。 |
| 灵活性 | 更换核酸简单，利于筛选。 | 更换核酸序列，需要重新构建和包装病毒，复杂而且费工费时。 |
| 效果 | 方法简单，实验环节少，尤其在转染小片断RNA方面，如：siRNA, miRNA, mimic, inhibitor等，有非常明确的效果，而且普通的用于细胞实验的RNA就可以，效果非常肯定。 | 理论上效果不错，但由于病毒实验环节较多，任何一个环节出问题都容易导致实验失败，而且失败后，不易查找原因。实际上很多实验室失败后，往往暂停或终止了动物实验，导致课题研究质量的降低。 |
| 持续时间 | 属于瞬时转染，单次转染效果持续7-14天，但可以通过多次注射维持转染效果 | 可以通过整合到基因组内长期发挥作用 |
| 费用 | 只花费几千元即可立即进行小规模预实验来确定动物实验效果。 | 进行预实验也需要花费数万元和数月包装病毒，环节多，易出错，不易成功。 |
EntransterTM-in vivo体内转染其他问题
1.每次动物实验，需要准备什么东西，器材？
①转染的核酸，如siRNA，miRNA，mimic、inhibitor，也可以转染DNA。
②转染试剂和动物。
③进行注射的器材。
2.可以转染的核酸都有什么？细胞实验的核酸可以用吗？
可以转染小片断RNA如siRNA，miRNA，mimic、inhibitor，也可以转染DNA。进行体外细胞实验的核酸就可以。但要求核酸高纯度。因为纯度直接影响转染效果，在同样剂量的情况下，高纯、高质量的核酸可比普通纯度的转染效果高几倍，而且不容易造成动物炎症反应和死亡。如果用通常质量的核酸用于体内转染，建议在保持转染试剂和核酸比例情况下，同步加大用量。
3.转染试剂和核酸需要使用多少？
请参考使用说明。
4.采用哪种注射途径比较好？
根据课题研究的不同，可以采用尾静脉注射，局部注射等方式。
5.注射后，试剂是如何在体内分布的，有特异性吗？
采用尾静脉注射，通过血液循环系统分布，没有特异性；通过局部注射，一般分布在局部。
6.试剂作用原理是什么？对动物有什么影响？
EntransterTM-in vivo体内转染试剂通过纳米技术合成，通过物理作用与核酸结合，浓缩包裹核酸，从而保护核酸免受免疫系统破坏，同时增强核酸进入细胞核中表达。不含任何动物来源成分，由于处于纳米尺度，粒径小，不易引起免疫反应，不影响动物和器官组织的功能，可以多次在同一动物注射。
7.转染效果如何检测？
一般根据课题研究要求进行，如果单纯检测转染效率，推荐用qRT-PCR方法和luciferase方法。还可根据研究，采用组织学和生理学，以及物理测量的方法进行。由于体内转染的复杂性，通常体外试验中常采用的转染GFP蛋白用荧光显微镜观察的方法，由于体内取出的组织材料背景高，检测较为困难。
- EntransterTM-in vivo什么时候推出来的？转染效果怎样？有哪些实验室应用？
EntransterTM-in vivo是2010年由英格恩公司研发推出的，虽然推出时间不长，但已有很多实验室应用，并陆续有很多高质量文献发表。转染效果非常好，尤其对小片断核酸(如siRNA，miRNA，mimic,inhibitor)的转染效果很好。目前应用的实验室，有美国、欧洲以及韩国、中国等许多国家的一流实验室。
局部注射的参考方法
1.局部注射的总注射剂量的确定
首先，必须确定局部注射的总注射量（最终注射量）。这个注射量可以根据文献，也可以通过实际操作来确定。实际操作过程中，一般采用多点注射，比如3点注射的方法。从不同方向进针，以药液覆盖全部靶组织为目标。
2.各组分剂量的确定
总注射剂量确定以后，比如通常直径1cm的皮下肿瘤，其最大注射剂量为50ul左右，那么，根据说明书比例，各组分相应如下：
RNA转染，50μl转染复合物的组成
| 50μl转染复合物 | 核酸 | 25μl (25μg)核酸 |
| 稀释液 | 12.5μl 10%葡萄糖溶液 | |
| 转染试剂 | 12.5μl的转染试剂 |
DNA转染，50μl转染复合物的组成
| 50μl转染复合物 | 核酸 | 16.67μl (16.67μg)核酸 |
| 转染试剂 | 33.33μl转染试剂 |
这是通常的各组分用量，如果条件允许，也可以少用或者不用葡萄糖溶液，以增加药液的量，达到更好的效果。但需要注意的是必须维持核酸和转染试剂的比例，RNA转染为：1ug(RNA):0.5ul(RNA体内转染试剂)；DNA转染为：1ug(DNA): 2ul(DNA体内转染试剂)。
3.核酸的稀释溶液
不论是质粒还是RNA粉末，建议用纯水稀释，并配制成1ug/ul浓度最好。如果由于某种原因，采用其它溶液稀释，可能会有部分沉淀产生。少量沉淀在动物体内不影响转染效果。
4.局部注射后的取样问题
由于局部注射容易造成药液分布不均，在注射的近端，药液浓度高，效果明细；远端，药液浓度低，效果低一些。所以，一方面，需要尽量将药液均匀覆盖全部靶组织，另一方面，后续实验取样时，在保证实验的情况下，尽量取注射区域附近的组织，不取或者少取药液覆盖差的组织，以增加实验效果。
产品价格
| Products | Cat. No. | Size | Price |
| EntransterTM-in vivo RNA Transfection Reagent | 18668-11-1 | 0.5ml | 询价 |
| EntransterTM-in vivo DNA Transfection Reagent | 18668-11-2 | 0.5ml | 询价 |
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电话：010-68489824，60535354
QQ：1136471275
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