293T分别包装两种病毒，浓缩后混合感染鼠CD8+ T细胞可以吗？

原则上可以，具体要看以下几个条件：

步骤可行性：

1. 分别包装：在293T细胞中分别转染两种构建（比如psPAX2 + pMD2.G + 各自的载体），收集病毒上清；

2. 浓缩：超速离心或PEG浓缩，两种病毒分别处理；

3. 混合感染：感染前混合两种浓缩后的病毒，用于感染小鼠CD8+ T细胞。

技术要点：

• T细胞激活：CD8+ T细胞对逆转录病毒天然不易感染，通常需要先用抗CD3/CD28珠子激活；

• 使用lenti而非MLV更佳：如果你用的是慢病毒（lentivirus），感染效率和细胞类型适应性更高，尤其是对于非分裂细胞（如初级T细胞）；

• MOI优化：T细胞感染效率低，可能需要提高MOI；

• 辅助物质：可加入如Polybrene 或 Spinfection（离心增强感染）提高效率。

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注意事项：

• 如果你用的是MLV类的复古病毒，它只能感染分裂中的细胞，所以在初级T细胞中效率可能很低；

• 如果你需要保证两种病毒都进入同一细胞，可能需要考虑是否做荧光分选（比如双阳性）或者使用linked expression（比如用2A肽连在一个载体里）；

• 共感染≠共整合：即使两种病毒都感染了，可能只有一种整合入基因组，因此表达仍有偏差。

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总结建议：

是的，你这个实验设计是合理的，293T分别包装→浓缩→混合感染鼠CD8+ T细胞是可行的。
建议：

• 使用慢病毒；

• 激活T细胞；

• 做合适的MOI优化；

• 尽可能做后续的验证（如流式分析GFP/RFP双阳性，或qPCR检测转基因表达）。