慢病毒滴度的计算

实验准备

1. 目标细胞：选择适合慢病毒感染的细胞株（如 HEK293T 或靶细胞）。
2. 病毒稀释：对病毒原液进行一系列梯度稀释（如 10⁻¹，10⁻²，10⁻³，10⁻⁴）。
3. 感染细胞：将稀释后的病毒感染到目标细胞中，确保设置对照组（未加病毒）。
4. 培养：培养 48-72 小时（根据病毒系统和荧光/抗性蛋白表达时间调整）。
5. 检测方法：检测报告基因表达水平（如荧光蛋白或抗性蛋白）。

滴度计算公式

​滴度 (TU/mL)=阳性细胞数×稀释倍数/感染体积 (mL)​

• TU/mL：Transducing Units/mL，代表每毫升病毒液中具有生物活性的病毒颗粒数量。
• 阳性细胞数：检测到荧光/抗性标志阳性表达的细胞数量。
• 稀释倍数：病毒稀释的倍数（例如，10⁻³ 稀释倍数为 1000）。
• 感染体积：每孔加的病毒液体积（如 0.1 mL 或 100 µL）。

具体步骤

1. 计数阳性细胞数
   • 通过流式细胞仪（FACS）或荧光显微镜计算表达荧光的细胞数量。
   • 例如，某稀释倍数组中感染后阳性细胞数为 100。
2. 应用公式
   • 稀释倍数：假设为 10⁻³（对应稀释倍数为 1000）。
   • 感染体积：假设每孔感染体积为 0.1 mL。
   • 滴度计算：
   • 滴度 (TU/mL)=100×1000​/0.1=1×10⁶TU/mL

注意事项

1. 稀释倍数范围：确保稀释倍数覆盖感染效率在 5%-50% 范围内（避免过高或过低）。
2. 阳性细胞计数：推荐重复实验以减少误差。
3. 感染体积和时间：记录精确感染条件，避免操作误差。