在亲和层析纯化抗体后,通常需要添加稳定剂以保护抗体免受降解。常见的稳定剂包括甘油、糖类(如蔗糖或海藻糖)、以及醇类(如乙醇)。添加这些稳定剂的目的是增加抗体的稳定性,特别是在长期保存或反复冻融过程中。以下是常用稳定剂的添加浓度建议:
1. 甘油 (Glycerol)
甘油常用于抗体溶液的冷冻保存,以防止冰晶形成和蛋白质变性。推荐添加浓度为:
- 最终浓度:10-50% (v/v)
2. 糖类 (Sugars)
糖类,如蔗糖或海藻糖,常用于增加蛋白质溶液的黏度和稳定性。推荐添加浓度为:
- 蔗糖 (Sucrose):最终浓度为5-10% (w/v)
- 海藻糖 (Trehalose):最终浓度为2-10% (w/v)
3. 醇类 (Alcohols)
醇类如乙醇(Ethanol)可以作为低浓度的防腐剂,但高浓度会导致蛋白质变性。推荐添加浓度为:
- 乙醇 (Ethanol):最终浓度一般为5-10% (v/v),不宜超过20%
添加方法:
- 准备稳定剂溶液:根据所需浓度配置稳定剂溶液。
- 混合:将稳定剂溶液缓慢加入抗体溶液中,轻轻混匀,避免剧烈振荡以防止抗体变性。
注意事项:
- 无菌操作:确保操作环境无菌,避免抗体溶液污染。
- 缓冲液匹配:添加稳定剂前,确保其与抗体溶液的缓冲液相容,以避免抗体失活或沉淀。
- 存储条件:根据稳定剂类型和抗体特性,选择适当的存储条件(如-20°C或4°C)。
通过合理添加稳定剂,可以有效延长抗体的保存期限,并维持其活性。