用AUTOMACS 系统进行总T 细胞、CD4^+细胞或CD8^+ T细胞的自动分离

材料

• 小鼠
• HBSS 洗涤缓冲液
• MACS 缓冲液
• 磁珠
• RPMI-10 完全培养基
• autoMACS 系统和分选柱
• 30μm 尼龙网或40μm预分离滤膜

步骤

1. 用 5 只小鼠的淋巴结或 2 只小鼠的脾脏制备单细胞悬液并去除红细胞 。
2. 将细胞在10ml HBSS 洗涤缓冲液中混悬后用血细胞计数器计数 。
3. 将细胞悬液在4℃，200g 离心10 min。弃上清后将沉淀按每 10⁸ 个细胞0.9ml MACS缓冲液的比例混悬。每 10⁸ 个细胞加入0.1ml 适当的磁珠后在4°C 孵育15min 。
4. 在孵育的时间里，打开autoMACS 系统电源。按产品说明书中操作规程运行清洁程序。
5. 将细胞悬液在4℃，200g 离心10 min。弃上清，在沉淀中加入足量的MACS 缓冲液使细胞浓度达到10⁸ 个细胞／ml, 充分混悬。将细胞通过30μm 尼龙网或40μm 预分离滤膜。用0.1 ~0.4ml MACS 缓冲液冲洗滤网。
6. 将细胞放到autoMACS 的上样通道。选择possel 程序，这样标记的细胞将从阳性通道洗脱。
7. 将细胞悬液在4℃, 200g 离心10 min 。弃上清后将沉淀用2~5ml RPMI- 10 完全培养基混悬。计数 。