单克隆细胞培养上清的制备

材料

• 杂交瘤
• DMEM-10 完全培养基
• 175 cm² 组织培养用细颈瓶
• 50ml 塑料锥底离心管，无菌
• 离心机和转子

过程

1. 将杂交瘤细胞移入含有DMEM-10 完全培养基的175 cm² 培养瓶中。培养至生长旺盛和准备细胞分瓶时取用（细胞密度应达到 1X10⁶ ~ 2X10⁶ 个细胞／ml) 。避免细胞生长密度过高导致死亡。

2. 以1 : 10 的比例分出部分细胞至另一个175cm² 培养瓶中。加入DMEM-10 完全培养基至总体积100ml, 培养至细胞过度生长，培养基呈黄色（酸性），出现死亡细胞（大约5d) 。或者，将高密度细 (1X10⁶~2X10⁶ 个细胞／ml) 随新鲜培养基转入培养瓶，培养2~3d 直到出现死亡细胞。

3. 将培养瓶内容物转入50ml 锥底离心管。室温下， 1500g 离心10min 。取上清，弃沉淀。

4. 用适当的方法检测上清液中MAb 的滴度。

5. 无菌环境储存培养上清；通常4℃中可以储存数周到数月，-20℃ 中可以储存至数年，在 -70°C 可以永久储存。可将培养上清等分为多个单位储存。尽量减少解冻和重新冰冻的次数 。