利用CRISPR精确编辑过敏原基因

迄今为止，CRISPR已经在一些治疗性应用中显示出前景，这无疑将指导疾病管理和治疗的新方法的发展。例如，CRISPR-Cas9被用来删除CEP290基因的突变，该基因是导致Leber先天性失明10型（LCA10）的原因，这是一种严重的视网膜营养不良症，通常源于单点突变引起的异常剪接。

镰状细胞病（SCD）和输血依赖性β-地中海贫血（TBT）是血红蛋白β亚单位基因（HBB）突变导致的红细胞异常或不足的两种情况，也是用CRISPR-Cas9的目标。

上述应用强调了CRISPR技术在解决单基因疾病方面的价值，特别是那些有相对简单的方法提供治疗的疾病（如直接视网膜下注射或体外血细胞编辑）。然而，许多CRISPR应用将需要对相关细胞或组织进行原位编辑，这最终将需要更复杂的递送方法或载体。目前，体内传递主要限于使用病毒载体或脂质纳米颗粒。

最近，CRISPR技术被用来在体外敲除Fel d 1的基因。从50只家猫的组织样本中提取基因组DNA，并对CH1和CH2进行测序，以确定基因中适合用CRISPR技术靶向的保守区域。评估了10个针对Fel d 1链1或2的sgRNA的小组。每个CRISPR sgRNAs与Cas9核酸酶一起使用脂质转染法传递到永生的猫科动物肾上皮细胞。通过对每个sgRNA的DNA序列分解或T7E1错配检测来评估CRISPR诱导的帧移突变导致的Fel d 1基因敲除。

迄今为止，CRISPR技术除了编辑猫的过敏原基因，还可编辑母鸡蛋、大豆、小麦、花生以及牛奶和山羊奶中的过敏原基因（ATI：α-淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂）（如上图）。这些研究证明了该技术在提高我们对过敏原蛋白的理解方面的价值，并强调了CRISPR编辑在为过敏性疾病提供更好的替代治疗方案方面的巨大潜力。未来，CRISPR技术也可用于识别新型过敏原，或直接修改免疫反应，作为防止识别过敏原蛋白的一种方法。今后，对过敏原蛋白序列、结构或抗体结合位点的全面分析，对于识别基本功能域或保守序列，以CRISPR删除为目标，将是非常宝贵的。此外，进一步开发将CRISPR试剂有针对性地输送到体内特定细胞或组织的方法，将证明对成功编辑成年动物的过敏原基因至关重要。