如何制备HAT 选择培养基？

培养基可用来有意识地从混合细胞群体中筛选特定性质的哺乳动物细胞。

材料

• 脾细胞与骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞(10: 1)
• 含10 ％胎牛血清 的RD 培养基
• 4X10^-5mol/L 氨基喋呤(A 液；用0. 1mol/L NaOH 配制成100 倍浓缩液）
• 1X10^-5mol/L 次黄嘌呤／ 1. 6 X 10^-3 mol/L 胸腺嘧啶脱氧核苷，双蒸水配制(HT液； 100 倍浓缩液）
• HAT 培养基： RD/10% FBS/ 1XA 液／ 1X HT 液
• 96 孔培养板

1. 以RD/ 10% FBS 培养液重悬脾细胞与骨髓瘤细胞融合物，其中骨髓瘤细胞浓度为1 X10⁶ 个／ml 。在悬液中分别加入0.01 倍体积的A 液和HT 液，配成HAT 选择培养基。96 孔板每孔内分注0.1ml 细胞悬液，然后置于湿润的37°C, 5% CO₂ 培养箱内培养。
   
2. 每2 ～ 3 天，从每孔内吸出一半的培养液，再补充新鲜的HAT 培养基液。
   
3. 21 天后，筛选杂交瘤细胞上清液，检测有无目的抗体。
   
4. 逐渐撤出HAT 培养液，换成HT 培养液，在两周内再换成RD/ 10% FBS 培养液。每隔3 天用HT 培养液替换一半的培养液，共4 次；再每隔3 天用RD/ 10% FBS 替换一半培养液。