培养基中pH 的调节

大多数细胞系增殖的最适pH 为7. 4, 当培养液逐渐变酸或变碱时，细胞的活力和增殖率将呈下降趋势。培养液必须缓冲细胞代谢葡萄糖和谷氨酰胺所产生的CO₂ 及乳酸。人们曾一度用碳酸氢盐、HCO₃^–与空气中CO₂ 共同构成一个缓冲体系，碳酸氢盐的低pk_a(pk_a=6. 1) 在pH7. 4 左右产生微弱的缓冲效能。无毒缓冲剂，如PIPES(pk_a=6. 8), MOPS (pk_a= 7. Z), TES (N-tris $$hydroxymethyl$$ methyl-Z-aminoethanesulfonic acid,pk_a=7. 5), HEPES(pk_a=7. 55) 在pH 6.0~8. 0范围内有效，更为科研工作者所常用。浓度为10~25mmol/L 的HEPES 是无血清培养基的标准缓冲体系，但它是额外添加的，不能替代碳酸氢盐和CO₂ 缓冲系统。培养基中常加酚红作为一种指示剂，它可提供肉眼可见的评估酸碱度的指标，随pH 下降，颜色由红变黄： pH7.4 时呈红色，pH7.0 时呈橘红色， pH6. 5 时呈黄色，当pH 上升时又变为浅紫色$pH7.6$ 和紫红色$pH7.8$ 。当酚红从橘红色变为黄色，表明培养液乳酸堆积，要及时更换。

材料

• 不含NaHCO₃或HEPES 的粉末状培养基
• HEPES
• NaHCO₃
  
  1. 用水溶解粉末状培养基并轻轻搅拌。加入HEPES （分子质量238.3) ，使之终浓度为15mmol/L, 搅拌直至溶解。按照推荐浓度将NaHCO₃ 加入到基础营养液中，搅拌备用。加其他培养基组分并调pH 至7.4
  2. 培养基过滤除菌
  3. 当完全培养基与温箱的温度、CO₂ 浓度相平衡时，调整pH