无菌操作的注意事项及常见问题

做不同的实验，操作上会有小小的不同，而且不可能每个动作都被描述，所以实验时必须注意自己的动作。通常要注意的就是每项操作时都要尽可能减少污染的可能性，所以动作要尽量减少。

距离，尽量将所需要的物品放在离手最近的地方。距离越近，移动就越少。

暴露，在空气中移动物品的时间越长，接触空气中微粒的概率则越大。试剂瓶敞口在空气中的时间越长，掉落进去的空气中的微粒越多。灼烧一下瓶口和移液管，使颗粒固定在表面和制造一个向上的气流，都可以减少掉落颗粒的数量。

灼烧不是为了灭茵，只需在火焰上烧1 ~ 3 秒即可。

移动，移动可以引起空气的流动。移动越快产生的流动也越快，所以只能慢慢地做那些必要的动作，而不能在空气中挥动移液管，也不要在工作区内交叉双手。

灌注，灌注会产生气溶胶，还会混入空气和一些未知的污染物，而且那些残留在瓶口的液体由于能够接触外界成为重要的污染源。无论何时，如果可能的话，转移液体时只使用移液管。

移液管可以用来转移最多50ml 的液体，使用时要确保移液管固定在移液辅助器上，50 ml 的移液管比较大，如果没有固定好就会漏气，操作时会有液滴流下。

保持试剂瓶与桌面成大约45 ° 角时打开盖子。这样可以尽量减少空气的污染以及在移液时产生最少的气溶胶。

如果必须取下盖子，那么要把它倒放在干净的台面上。

试剂瓶盖的放法有两种，正放和反放，这两种都是可行的，选一种就可以。如果盖子是反着放的，那么确保手不要从上方经过，正着放时要保证桌面是干净的。

使用玻璃的移液管及打开试剂瓶时都要用火烧一下。本生灯要放置在手和试剂瓶之间。

塑料的试剂瓶和移液管不能用火烧。不论是否用火烧过，打开瓶口时都要迅速，并且开口尽可能的小，移液时要使试剂瓶保持45° 角。
轻轻地吸取液体，不要旋转试剂瓶。这样做可以尽量减少气溶胶，打开离心瓶时也要小心。

不要让试剂瓶保持开口状态。使用完任何一个试剂瓶时要立即盖上盖子，不要把移液管放在开口的试剂瓶内。

无菌操作中常见的一些错误
1. 液体吸取过多时。丢弃移液头，检查移液器，可能要更换过滤器。
2. 当移液头接触到试剂瓶外侧、底部或移液管盒外壁等其他固体物时，弃掉移液头。
3. 开口的移液头盒或试管掉到地上，丢掉它们。
4. 当手（即使是戴若手套）等物体接触了那些避免微粒进入的HEPA 过滤器时，这些过滤器要丢弃，因为这是一个严重的污染途径。
5. 重复使用了移液管。当移液管已经被浸湿时，更容易被空气污染。