细胞的聚集体培养

聚集体培养(aggregate culture) 是指先将肿瘤细胞在旋转摇动培养仪上培养，使肿瘤细胞形成规则的细胞球体结构，然后再将球体进行静止培养，肿瘤细胞可自由从球体向周围移动，观察测量肿瘤细胞向周围移动的情况，记录移出细胞数、细胞移出最远距离等，也可计算肿瘤细胞运动的速度，比较不同肿瘤细胞运动性的差别。

（一）材料与设备

50ml 锥形瓶、旋转摇动培养仪、CO₂培养箱、解剖显微镜、培养瓶（皿）、培养液、24 孔板。

（二）操作步骤

1. 将5×10⁶ 个／ml 细胞悬液 6ml 移于50ml 锥形瓶中， 置于旋转摇动培养仪，37°C 、5% CO₂ 培养箱内连续摇动培养3d , 形成规则完整的球体。
2. 将球体放于培养皿中，在显微镜下选出直径0.2mm 的球体， 用培养液反复洗涤， 除去附着的单个细胞，将球体置于24 孔板中培养。
3. 每孔加1 个球体和2ml 培养液。 37°C 、5% CO₂ 培养箱内培养不同时间（如12h 、24h 、36h 等），观察肿瘤细胞向周围移动的情况。

（三）注意事项

1. 转动速度以每分钟60-80 转为宜。
2. 反复洗涤球体，除去附脊的单个细胞。
3. 球体的直径大小可利用目镜中放置的测彼尺进行测量。