石蜡切片的操作要点

组织化学中的组织切片主要有石蜡切片法、冰冻切片法和振动切片法等。
石蜡切片法比较节省时间，操作容易，可切极薄的组织片$4\mu m\mathrm{以}\mathrm{下}，\mathrm{通}\mathrm{常}\mathrm{为}610\mu m\mathrm{厚}\mathrm{的}\mathrm{切}\mathrm{片}），\mathrm{能}\mathrm{做}\mathrm{连}\mathrm{续}\mathrm{切}\mathrm{片}，\mathrm{且}\mathrm{组}\mathrm{织}\mathrm{块}\mathrm{可}\mathrm{包}\mathrm{埋}\mathrm{在}\mathrm{石}\mathrm{蜡}\mathrm{中}\mathrm{永}\mathrm{久}\mathrm{保}\mathrm{存}。\mathrm{但}\mathrm{石}\mathrm{蜡}\mathrm{切}\mathrm{片}\mathrm{只}\mathrm{能}\mathrm{用}\mathrm{于}\mathrm{较}\mathrm{小}\mathrm{的}\mathrm{组}\mathrm{织}\mathrm{块}，\mathrm{不}\mathrm{适}\mathrm{用}\mathrm{于}\mathrm{大}\mathrm{的}\mathrm{组}\mathrm{织}\mathrm{块}。\mathrm{石}\mathrm{蜡}\mathrm{切}\mathrm{片}\mathrm{法}\mathrm{能}\mathrm{改}\mathrm{变}\mathrm{组}\mathrm{织}\mathrm{内}\mathrm{的}\mathrm{化}\mathrm{学}\mathrm{反}\mathrm{应}，\mathrm{甚}\mathrm{至}\mathrm{使}\mathrm{可}\mathrm{显}\mathrm{示}\mathrm{的}\mathrm{酶}\mathrm{和}\mathrm{其}\mathrm{他}\mathrm{物}\mathrm{质}（\mathrm{如}\mathrm{脂}\mathrm{类}）\mathrm{完}\mathrm{全}\mathrm{丢}\mathrm{失}，\mathrm{或}\mathrm{使}\mathrm{蛋}\mathrm{白}\mathrm{质}\mathrm{变}\mathrm{性}、\mathrm{酶}\mathrm{失}\mathrm{活}\mathrm{等}。\mathrm{因}\mathrm{此}，\mathrm{在}\mathrm{有}\mathrm{条}\mathrm{件}\mathrm{时}\mathrm{可}\mathrm{采}\mathrm{用}\mathrm{冰}\mathrm{冻}\mathrm{干}\mathrm{燥}\mathrm{法}\mathrm{或}\mathrm{冰}\mathrm{冻}\mathrm{替}\mathrm{代}\mathrm{法}，\mathrm{使}\mathrm{组}\mathrm{织}\mathrm{块}\mathrm{在}\mathrm{低}\mathrm{温}\mathrm{下}\mathrm{脱}\mathrm{水}\mathrm{干}\mathrm{燥}，\mathrm{以}\mathrm{保}\mathrm{存}\mathrm{其}\mathrm{化}\mathrm{学}\mathrm{成}\mathrm{分}\mathrm{或}\mathrm{酶}\mathrm{活}\mathrm{性}。\mathrm{石}\mathrm{蜡}\mathrm{切}\mathrm{片}\mathrm{的}\mathrm{操}\mathrm{作}\mathrm{要}\mathrm{点}\mathrm{如}\mathrm{下}：(1$ 切片刀或一次性切片刀片必须锋利无凹痕。
$2$ 载玻片必须清洗洁净。
$3$ 将切片刀或刀片安装在持刀座上（以15°为宜），不切片时应将刀锁紧，以免受伤。
$4$ 将蜡块固定于支持器上，并调整蜡块和刀刃至适当位置（刀刃与蜡块表面呈5 °夹角）。
$5$ 细心移动刀座或蜡块支持器，使蜡块与刀刃接触，旋紧刀座和蜡块支持器。
$6$ 用右手匀速旋转切片机轮，修切蜡块表面至包埋其中的组织块完整
暴露。
$7$ 调节切片厚度调节器（一般为4~6μm) ，切出的蜡片应连续成带，完
整无缺，厚度均匀，无刀痕、颤痕、皱折、开裂、缺损、松解等。
$8$ 以专用小摄子轻轻夹取蜡片，放入伸展器的温水中$45°C\mathrm{左}\mathrm{右}），\mathrm{使}\mathrm{切}\mathrm{片}\mathrm{全}\mathrm{面}\mathrm{展}\mathrm{开}。\mathrm{注}\mathrm{意}\mathrm{水}\mathrm{温}\mathrm{必}\mathrm{须}\mathrm{适}\mathrm{宜}，\mathrm{水}\mathrm{面}\mathrm{必}\mathrm{须}\mathrm{洁}\mathrm{净}。(9$ 将蜡片附贴千涂有蛋白甘油或经3－氨丙基－三乙氧基硅烧$3-aminopropyltriethoxysilane,APES$ 等贴片剂处理过的载玻片上，蜡片与载玻片之间应无气泡。
$10$ 将贴附了蜡片的载玻片置千烤箱中烘烤$6062°C,3060min$ ，然
后即可进行染色。