荧光原位杂交会用到哪些试剂？

一、实验材料、试剂、仪器耗材：

人的MyoD1（MYF3)基因探、人外周血中期染色体细胞标本
指甲油、甲酰胺、氯化钠、柠檬酸钠、氢氧化钠、吐温20等
恒温水浴锅、培养箱、染色缸、载玻片、Nikon E-400荧光显微镜、盖玻片、封口膜、200μL移液器、暗盒等

二、相关溶液的配制

（1）20×SSC：175.3 g NaCl，88.2 g柠檬酸钠，加水至1 000 mL（用10 mol/L NaOH调pH 至7.0）。

（2）去离子甲酰胺（DF）：将10 g混合床离子交换树脂加入100 mL甲酰胺中。电磁搅拌30 min，用Whatman l号滤纸滤。

（3）体积分数70%甲酰胺/2×SSC：35 mL甲酰胺，5 mL 20×SSC，10 mL水。

（4）体积分数50%甲酰胺/2×SSC：100 mL甲酰胺，20 mL 20×SSC，80 mL水。

（5）体积分数50%硫酸葡聚糖（DS）：65℃水浴中融化，4℃或-20℃保存。

（6）杂交液：8 μL体积分数25%DS，20 μL 20×SSC混合。（或40 μL体积分数50% DS，20 μL 20×SSC，40 μL ddH2O混合）取上述混合液50 μL，与5 μL DF混合即成。其终浓度为体积分数10% DS，2×SSC，体积分数50% DF。

（7）PI/antifade溶液

PI原液：先以双蒸水配置溶液，浓度为100 μg/mL，取出1 mL，加39 mL双蒸水，使终浓度为2.5 μg/mL。

Antifade原液：以PBS缓冲液配制该溶液，使其浓度为10 mg/mL，用0.5 mmol/L的NaHCO3调pH值为8.0。取上述溶液1 mL，加9 mL甘油，混匀。

PI/antifade溶液：PI与antifade原液按体积比1:9比例充分混匀，－20℃保存备用。

（8）DAPI/antifade溶液：用去离子水配制1mL/mg DAPI储存液，按体积比1:300，以antifade溶液稀释成工作液。

（9）封闭液I：体积分数5% BSA 3 mL，20×SSC 1 mL，ddH2O 1mL，Tween20 5 μL混合。

（10）封闭液II：体积分数5% BSA 3mL，20×SSC 1mL，goat serum 250 μL，ddH2O 750 μL，Tween20 5 μL混合。

（11）荧光检测试剂稀释液：体积分数5% BSA 1mL，20×SSC 1mL，ddH2O 3mL，Tween20 5μL混合。

（12）洗脱液：100 mL 20×SSC，加水至500 mL，加Tween20 500 μL。