微型凝胶电泳后使用溴化乙锭（EB）估算条带中DNA 数量

此方案概述了一个快速定量DNA 的方法，并同时分析其物理状态。溴化乙锭染色后，用UV 灯照射透视法可以发现包含＞5ngDNA 的DNA 条带。CCD 照相机拍下未知样品的影像，然后与一系列已知含量标准品进行强度（灰度）对比，从而估计未知样品中DNA的含量。染色凝胶分析是一种快速的同时测量DNA 的数量并分析其物理状态的方式。

SYBR 染料也可用于染色并大致确定凝胶条带中DNA 的含量。然而，不同于溴化乙锭，SYBR 染料只能用于电泳后染色。通常情况下，凝胶需浸入含有染料在溶液中至少1h, 这给实验者造成不方便。

试剂

含溴化乙锭$0.5\mu g/mL$ 的微型琼脂糖凝胶$0.6$

DNA 样品

DNA 标准品（见步骤2)

电泳缓冲液（通常为1 XTAE<A>或0.5XTBE<A>)

凝胶上样缓冲液IV<A>

MgCl₂ $1.0mol/L$

设备

琼脂糖凝胶电泳设备

凝胶短波紫外光照射下拍摄设备

能提供500V/200mA 的电源设备

方法

1. 将2mLDNA 样品与0.4mL 上样缓冲液IV 混合，注入含溴化乙锭$0.5\mu g/mL$ 的微型琼脂糖凝胶(0.6% ）狭槽中。
2. 将一系列2mL DNA 标准品$0、2.5mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、20mg/mL、30mg/mL、40mg/mL\mathrm{和}50mg/mL$ 与0.4 mL 上样缓冲液IV 混合，同样注入凝胶孔中。
3. 进行电泳， 直至溴酚蓝迁移1 ~ 2cm 。
4. 凝胶放入含有0.01 mol/L MgCl₂ 的电泳缓冲液浸泡5min 脱色。
5. 在短波紫外光照射下给凝胶拍照。对比标准品的荧光强度估计未知DNA 的浓度。

DNA 样品中可能存在的污染物可以增强或猝灭荧光。为避免出现问题， DNA 样品和标准品可以被置于含溴化乙锭$0.5mg/mL$ 或SYBR Green I 的1 ％板式琼脂糖凝胶上。让凝胶站立数小时从而污染的小分子可以弥散开去。然后拍照。