色谱法分离蛋白质

色谱

与DNA 和RNA 一样，蛋白质可以进行常规的分离，或者用色谱法来分离。主要用的色谱法是凝胶过滤、

离子交换层析和亲和层析。

1.  凝胶过滤，基于分子的大小对物质进行分离。

       工作原理：固定相中包含有很多的孔，只有较小的分子才可以进入。

      填料：葡聚糖（交联右旋糖苷）、Sephacryl （烯丙基葡聚糖和N, N－亚甲双丙烯酰胺交联共聚物）、

琼脂糖。

      实例：用G50 的柱子去除切口平移反应中那些没有参与反应的核苷酸

2.  离子交换，基于物质的电荷特性分离。

       工作原理：将蛋白质或者其他带电物质通过电荷连接在固定相上，用较高离子强度的缓冲液来洗脱。

柱子的填充物可以是阴离子、阳离子或者两者都有。

       填料： DEAE 纤维素、唬石(amberlite) 、Dowex 、CM琼脂糖。

       实例：在DEAE 薄层上分离凝胶电泳的DNA 样品。

3.  亲和层析，基于物质的天然结合进行物质分离。

      工作原理：分子的纯化具有专一性，可以通过固定相上的配体可逆地吸附。

      填料：寡聚核苷酸(dT) 纤维素、生物素、肝素。

      实例：抗体与蛋白 A 的结合。

注意：许多层析填料在使用前都需要浸泡溶胀，否则不能有效的工作，有一些还需要在缓冲液中放置过夜。