如何利用好腺病毒感染的原理和特点？

一、原理

腺病毒$Adenovirus，Ad$是一种无包膜的线状双链DNA病毒，其复制不依赖于宿主细胞的分裂。有近50个血清型，大多数Ad载体都是基于血清型2和5，通过转基因的方式取代E1和E3基因，降低病毒的复制能力。这些重组病毒仅在高水平表达E1和E3基因的细胞中复制，因此是一种适用于治疗的高效控制系统。

二、特点

1） 几乎可以感染所有类型的细胞

2） 可以获得复制缺陷型 $E1\mathrm{和}E3\mathrm{缺}\mathrm{失}$  的腺病毒

3） 病毒滴度高，产生病毒经过浓缩后可以达到 1012 PFU/mL，能有效的进行增殖。

4） 腺病毒载体感染宿主的范围比较广，制备容易，操作简单.

5） 感染细胞时，不整合到染色体中，不存在激活致癌基因或插入突变等危险，生物安全性高。

三、腺病毒包装简要流程

1） 构建表达 siRNA/miRNA 的腺病毒载体

2） 采用 PacI 消化纯化的质粒。

3） 消化好的腺病毒表达载体转染 293A 细胞，收获细胞以制备病毒粗提液。

4） 将病毒粗提液感染 293A 细胞以扩增病毒。

5） 分装，-80℃保存。